[发明专利]一种制备抗体-美登素类生物碱药物偶联物的方法

摘要

本发明涉及一种制备抗体-美登素类生物碱药物偶联物的方法。该方法包括：抗体置换至反应缓冲液中，双功能连接剂-美登素生物碱用有机溶剂溶解制得美登素生物碱药物的母液；按比例将置换的抗体与美登素生物碱母液混合，进行偶联反应，反应温度20～30℃，反应时间1～4小时；反应液进行阴离子交换层析，收集的流穿液进行SephadexTM G25脱盐层析柱纯化，收集第一个出峰样品，即为所制备的抗体-美登素生物碱类药物偶联物。本发明方法制得的抗体-美登素类生物碱药物偶联物具有合适的偶联率、高的纯度和低的内毒素含量。

主权项

一种抗体‑美登素类生物碱药物偶联物的制备方法，包括以下步骤：（1）抗体置换缓冲液利用超滤浓缩或者脱盐层析的方式置换抗体原液至反应缓冲液中，反应缓冲液中含有0.02%～0.1%v/v的表面活性剂，浓缩至抗体浓度在20～30mg/ml；得置换后的抗体；所述的抗体原液单克隆抗体的原液；（2）制备美登素生物碱类药物母液取连接有双功能连接剂的美登素生物碱类药物，即双功能连接剂‑美登素生物碱，用有机溶剂溶解，制备含有10mg/ml美登素生物碱药物的母液；优选的，所述美登素生物碱为DM1或DM4；（3）偶联反应按双功能链接剂‑美登素生物碱与抗体的摩尔比为5～6:1的比例，将第（1）步中得到的置换后的抗体与第（2）步中得到的美登素生物碱母液混合，进行偶联反应，反应温度20～30℃，反应时间1～4小时；（4）阴离子交换层析将上述反应液上样至阴离子交换层析柱进行纯化；首先用平衡缓冲液平衡阴离子层析柱，然后上样，层析柱载量为30‑50mg/ml，上样流速为75‑100cm/h，收集流穿液，上样完毕后，再用平衡缓冲液冲洗阴离子层析柱，直至收集完毕；（5）脱盐层析将上述阴离子交换层析收集的流穿液进行SephadexTM G25脱盐层析柱纯化；脱盐缓冲液平衡脱盐层析柱，脱盐缓冲液含有0.02～0.1%v/v的表面活性剂，将阴离子交换层析的收集液上样至脱盐层析柱，流速为2～5cm/h，收集第一个出峰样品，即为所制备的抗体‑美登素生物碱类药物偶联物。