[发明专利]检测耳聋相关的线粒体T12201C突变试剂盒及应用有效
| 申请号： | 201310172065.X | 申请日： | 2013-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN103290114A | 公开（公告）日： | 2013-09-11 |
| 发明（设计）人： | 管敏鑫;蒋萍萍;冀延春;郑静;梁敏;龚莎莎;徐静 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明的目的是提供一种检测耳聋相关的线粒体DNAT12201C突变的试剂盒，由DNA提取混合液、扩增T12201C片段的PCR混合液、针对T12201C设计的一对外引物、针对T12201C设计的一对内引物、限制性内切酶、阳性对照、阴性对照和盒体组成。本发明运用蛋白酶K消化裂解法，从少量标本中快速提取基因组DNA，既解决传统上从耳聋患者血液中提取DNA的问题，减轻被检者的痛苦，又解决了跨地区传递样本的问题；既提高了酶切的特异性，又确保结果的特异性和稳定性；既降低检测成本，操作又简便快速。可在检测与耳聋相关的线粒体基因ND1T12201C突变中的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 耳聋 相关 线粒体 t12201c 突变 试剂盒 应用 | ||
【主权项】：
一种检测耳聋相关的线粒体DNA T12201C突变的试剂盒，由DNA提取混合液（1）、扩增T12201C片段的PCR混合液（2）、针对T12201C设计的一对外引物（3）、针对T12201C设计的内引物（4）、限制性内切酶（5）、阳性对照（6）、阴性对照（7）和盒体（8）组成，其中，DNA提取混合液（1）由细胞裂解液、蛋白酶K、氯仿、苯酚、无水酒精组成；扩增T12201C片段的PCR混合液（2）包括dNTP(脱氧单核苷酸)、10×PCR缓冲液、MgCl2、三蒸水和Taq酶，针对T12201C设计的外引物（3）有外前向引物F: TAT CAC TCT CCT ACT TAC AG (SEQ ID NO:1)，外反向引物R: AGA AGG ATA TAA TTC CTA CG (SEQ ID NO:2)；针对T12201C设计的内引物（4）包括内前向引物F: AATATAGTTTAACCAAAACATCAGATTGTGAATCTGACAACAGAGGCTTACGACCCAATA (SEQ ID NO:3)，内反向引物R: ATAGTAGTGTGCATGGTTATTAC (SEQ ID NO:4)；限制性内切酶（5）包括限制性内切酶SspⅠ；阳性对照（6）是不含有线粒体序列第12201位点发生T>C突变的酶切样本；阴性对照（7）是含有线粒体序列第12201位点发生T>C突变的酶切样本。
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