[发明专利]131I标记抗VEGFR2嵌合Fab及其应用

摘要

本发明公开了一种131I标记抗VEGFR2嵌合Fab及其应用。131I标记抗VEGFR2嵌合Fab由氯胺-T氧化法制备，具体包括：131I标记抗VEGFR2嵌合Fab、分离纯化131I-FA8H1、测定放化纯和比活度。本发明的131I标记抗VEGFR2嵌合Fab，适用于核素显像诊断肝癌；用131I-FA8H1进行靶向治疗肝癌，131I-FA8H1可有效抑制肿瘤生长，比单独用FA8H1或131I都有明显好的效果；131I-FA8H1促使肿瘤组织大片坏死，诱导肝癌细胞凋亡，并且不长时间抑制外周血wbc而降低机体免疫力的副作用，可见，抗VEGFR2嵌合Fab在制备用于治疗肝癌药物中具有很好的应用。

主权项

一种131I标记抗VEGFR2嵌合Fab，其特征在于，由氯胺‑T氧化法制备，具体包括：1）100 μg FA8H1加200 μL PB中；同时加60 μL Na131I混和均匀，再加100 μL氧化剂氯胺‑T，室温下振荡反应1 min；而后向上述溶液中加200 μL偏焦亚硫酸钠，室温振荡反应5 min；最后加入2 mL 0.2%BSA‑PBS，结束标记；2）分离纯化131I‑ FA8H1：将上述反应液加入PD‑10脱盐柱中，待液体全部流入柱内后持续加入0.2%BSA‑PBS冲洗柱子；同时收集流出液体，每10滴收集一管，共收集30管；将收集的30管分别各取5 μL置于一新管中，做好相应标记；在全自动γ计数仪上分别读取各管的γ计数；根据结果判断131I‑FA8H1的收集峰管，并计算同位素标记的效率；3）测定放化纯和比活度：取出装有131I‑FA8H1的峰管（5 μL/管），分别加750 μL 0.2%BSA‑PBS和750 μL 10%的三氯乙酸（TCA）溶液，充分混匀，可见乳白色沉淀；室温离心，3 000 rpm，10 min；负压吸引器吸尽管中液体，依次测定各管沉淀的γ计数；根据公式计算每个峰管的放化纯，放化纯% = 沉淀γ计数/相应峰管γ计数×100%选取放化纯高的峰管合并收集，置于铅盒中4℃保存备用；根据标记率及放射性活度计算131I‑FA8H1的比活度。