[发明专利]一种菲律宾蛤仔寡肽的制备方法及其在抗前列腺癌中的应用

摘要

本发明涉及一种菲律宾蛤仔寡肽，其氨基酸序列为Asp-Trp-Pro-His，公开了该种寡肽的制备方法，即利用胰蛋白酶酶解获得目标寡肽酶解液，再经超滤、阴离子交换、及反相高效液相色谱进一步分离纯化获得目标寡肽；同时还公开了该种寡肽在抗前列腺癌中的应用，具体的，可有效抑制体外培养前列腺癌PC-3、DU-145细胞生长，诱导凋亡，改变细胞周期。与现有技术相比，本发明制备菲律宾蛤仔寡肽的方法，工艺过程简单，杂质少，效率高，同时在现有技术的基础上，揭示了该种寡肽在抗前列腺癌上的效用。

主权项

一种菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：①将菲律宾蛤仔洗净，取肉后加超纯水搅拌，然后去杂质匀浆，制得匀浆样品；②取适量的所述匀浆样品，加入适量体积的超纯水，此时原料与超纯水的比值为1:1～1:4，加入蛋白酶在水浴箱中进行酶解反应，其中加酶量为300ug～1500ug,酶解反应的pH值为8～9，酶解时间为4h～12h，酶解温度为40℃～60℃；③酶解反应结束后灭活、离心、取上清液备用；④将所述上清液加入超滤膜中进行超滤，收集分子量小于3KDa的酶解物质进行冷冻干燥备用；⑤利用DEAE SepharoseFF阴离子交换，采用磷酸缓冲液和NaCl溶液对所得酶解液进行阶段洗脱，在280nm波长处收集最高肽峰冷冻干燥后贮存备用；⑥将DEAE SepharoseFF阴离子交换收集的最高肽峰利用反相高效液相色谱法进行进一步纯化，在220nm波长处出现唯一峰，收集该峰，冷冻干燥制得所述菲律宾蛤仔寡肽。