[发明专利]一种鉴别金银花和山银花的PCR-RFLP方法无效
| 申请号： | 201310213342.7 | 申请日： | 2013-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN103290127A | 公开（公告）日： | 2013-09-11 |
| 发明（设计）人： | 朱云国;王庆霞;程舟;杨晓伶;李珊 | 申请（专利权）人： | 同济大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 张磊 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于中药材种质鉴定技术领域，具体涉及一种鉴别金银花与山银花的PCR-RFLP方法。金银花的特征DNA碱基序列为：5'-Y^GGCCR-3’；限制性内切酶CfrⅠ或其同切酶EaeⅠ可识别并切割该序列。鉴定过程如下：提取药材DNA；用一对引物进行PCR扩增；用限制性内切酶CfrⅠ或其同切酶EaeⅠ消化PCR产物；琼脂糖凝胶电泳分析结果；通过与山银花PCR-RFLP特征结果相比较，即可判断供试品是金银花还是山银花药材。本发明利用金银花与山银花DNA序列的差异，建立了快速、便捷、可靠的PCR-RFLP鉴别方法，对于保证金银花的药材质量，打击用山银花冒充金银花的不良行为，保护消费者权益具有重要的价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 金银花 山银花 pcr rflp 方法 | ||
【主权项】：
一种鉴别金银花和山银花的PCR‑RFLP方法，其特征在于具体步骤如下：(1)从金银花及山银花药材样品中提取DNA，利用改良CTAB法，用无离子水将供试样品的DNA浓度调节至0.1~0.3μg/μl；(2)通过一对引物，利用聚合酶链式反应（PCR），扩增步骤(1)得到的一段DNA，其中：用于PCR扩增的一对引物的DNA序列为：Y1：5’‑AGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG‑3’Y2：5’‑TCCTCCGCTTATTGATATGC‑3’(3)对步骤(2)得到的PCR产物中加入限制性内切酶CfrⅠ或其同切酶EaeⅠ，进行酶切，限制性内切酶CfrⅠ或其同切酶EaeⅠ的酶切位点为：Y∧GGCCR；(4)琼脂糖凝胶电泳分析；(5)鉴定结果的判断：若只有一条722bp的条带则供试样品为山银花，若有196bp和526bp两条带则供试样品为金银花。
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