[发明专利]一种基于恒温级联核酸扩增的铅离子检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种基于恒温级联核酸扩增的铅离子检测试剂盒及其检测方法，通过脱氧核酶识别铅离子，并结合链置换扩增与单链触发的DNA分子机器实现恒温级联核酸扩增，将铅离子浓度转化为显著放大的荧光检测信号，从而精确测定微量铅离子浓度。本发明相对于基于脱氧核酶的其他方法相比更加快速，灵敏度更高；且对设备的要求更低，操作更加简单。

主权项

一种基于恒温级联核酸扩增的铅离子检测试剂盒，其特征在于，包括：脱氧核酶‑底物连接体，包括通过连接序列连接的脱氧核酶和底物，在铅离子催化下脱氧核酶的底物断裂，产生可作为链置换扩增引物的寡聚脱氧核苷酸链；扩增底物，包括dNTPs混合物；DNA分子机器工具，包括具有链置换扩增活性的DNA聚合酶和核酸切口酶；触发DNA分子机器工具的SDA模板，与脱氧核酶产生的寡聚核苷酸链杂交后被DNA聚合酶所扩增；具有发卡结构的发卡分子H，能够与SDA模板产物相识别，在识别后杂交打开发卡结构；具有茎环结构的分子信标探针，其两端分别标记有荧光基团和猝灭基团，分子信标探针具有能够与被打开的发卡分子H相互补的序列；以及DNA分子机器扩增反应缓冲液。