[发明专利]一种将人类成纤维细胞转分化为视网膜色素上皮细胞的方法有效
申请号: | 201310222217.2 | 申请日: | 2013-06-05 |
公开(公告)号: | CN103290051A | 公开(公告)日: | 2013-09-11 |
发明(设计)人: | 刘光慧;张克兢;任若通;李颖;易斐;曲静 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生物物理研究所 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N5/10 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人: | 王旭 |
地址: | 100101*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明涉及一种在体外将哺乳动物成纤维细胞转分化为视网膜色素上皮细胞的方法,所述方法包括将多种转录调控因子和报告基因转入哺乳动物成纤维细胞中,然后使用多种培养基进行培养从而获得视网膜色素上皮细胞。 | ||
搜索关键词: | 一种 人类 纤维 细胞 化为 视网膜 色素 上皮细胞 方法 | ||
【主权项】:
一种在体外将哺乳动物成纤维细胞转分化为视网膜色素上皮细胞的方法,所述方法包括以下步骤: a)构建分别含有编码哺乳动物转录调控因子cMyc、MitfA、Otx2、Rax和Crx的基因序列的转染载体; b)构建含有在视网膜色素上皮细胞特异性启动子控制下的报告基因的转染载体; c)将所述步骤a)中构建的转染载体和所述步骤b)中构建的转染载体转染到在用于培养哺乳动物体细胞的培养基中培养的所述哺乳动物成纤维细胞中; d)在转染后将所述用于培养哺乳动物体细胞的培养基换成用于培养哺乳动物干细胞的培养基继续培养直至观察到细胞开始出现形态改变; e)将所述用于培养哺乳动物胚胎干细胞的培养基换成含有基质胶的用于哺乳动物胚胎干细胞到神经干细胞分化的培养基继续培养以使所述哺乳动物成纤维细胞进一步分化; f)将所述含有基质胶的用于哺乳动物胚胎干细胞到神经干细胞分化的培养基换成用于培养视网膜色素上皮细胞的培养基继续培养直至获得所述报告基因的阳性细胞克隆。
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