[发明专利]一种制备谷氨酸脱羧酶的方法

摘要

本发明涉及一种制备谷氨酸脱羧酶的方法，步骤如下：（1）含谷氨酸脱羧酶的微生物细胞培养、离心收集细胞、细胞破碎，调细胞破碎液的pH值和离子强度；（2）配制反胶团萃取体系溶液和反萃取水相溶液；（3）利用反胶团进行萃取；（4）进行反萃取，得到含谷氨酸脱羧酶的水溶液；（5）超滤膜过滤浓缩，截留液冷冻干燥，制得谷氨酸脱羧酶产品。本发明可实现谷氨酸脱羧酶制备的连续化、规模化，并且酶的制备工艺简便，生产周期短，酶活力回收率高，萃取剂可循环使用，谷氨酸脱羧酶的生产成本较低。

主权项

一种利用反胶团萃取体系制备谷氨酸脱羧酶的方法，步骤如下：（1）将含谷氨酸脱羧酶的微生物细胞进行培养，得细胞培养液，离心，制得湿菌体细胞，将湿菌体细胞重悬于去离子水中，制得细胞悬浮液，破碎细胞，得到细胞破碎液；调细胞破碎液的pH值为5.5～7.0，然后加入无机盐调节溶液的离子强度为0.10～0.20mol/L，制得含有谷氨酸脱羧酶的细胞破碎溶液；（2）将助溶剂加入到有机溶剂中，助溶剂与有机溶剂的体积比为1:（4～10），摇匀，再加入表面活性剂，使表面活性剂在有机溶液中的浓度为100～250mmol/L，混合均匀，制得反胶团体系溶液；将缓冲剂加入到去离子水中配制0.10～0.20mol/L的缓冲溶液，再将反萃取助剂加入到缓冲溶液中，使反萃取助剂在缓冲溶液中的质量浓度为5～30wt%，摇匀，然后加入无机盐调节溶液的离子强度为1.0～2.0mol/L，制得反萃取水相溶液；（3）将步骤（1）制得的含有谷氨酸脱羧酶的细胞破碎溶液加入到步骤（2）制得的反胶团体系溶液中，反胶团体系溶液与细胞破碎溶液的体积比为1:（1～10），混合均匀，萃取操作温度为10～25℃，离心分相，取有机相，制得含有谷氨酸脱羧酶的反胶团有机溶液；（4）向步骤（3）制得的含有谷氨酸脱羧酶的反胶团有机溶液中加入步骤（2）制得的反萃取水相溶液，反萃取水相溶液与含有谷氨酸脱羧酶的反胶团有机溶液的体积比为1:（1～10），混合均匀，反萃取操作温度为30～40℃，离心分相，制得含有谷氨酸脱羧酶的水溶液；（5）将步骤（4）制得的含有谷氨酸脱羧酶的水溶液用超滤膜过滤浓缩，收集截留液，冷冻干燥，制得谷氨酸脱羧酶。