[发明专利]一种携带人金属硫蛋白基因的脐带间充质干细胞及其应用有效
| 申请号： | 201310251408.1 | 申请日： | 2013-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN104232585B | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 丁长才;湛敏 | 申请（专利权）人： | 丁长才 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/864;A61K35/44;A61P39/06;A61P39/02 |
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| 地址： | 518055 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种携带人金属硫蛋白基因的脐带间充质干细胞的制备方法，其包括如下步骤：构建携带金属硫蛋白基因的重组腺相关病毒载体质粒pAAV‑MCS‑hMT；制备携带人金属硫蛋白基因的重组腺相关病毒rAAV‑hMT，测定滴度；将重组腺相关病毒rAAV‑hMT感染脐带间充质干细胞，得到携带人金属硫蛋白基因脐带间充质干细胞。本发明得到的携带金属硫蛋白基因脐带间充质干细胞用于衰老模型小鼠，能有效延缓小鼠衰老进程；将其用于高血铅模型小鼠，可明显降低小鼠血铅含量。 | ||
| 搜索关键词： | 金属硫蛋白基因 脐带间充质干细胞 携带 重组腺相关病毒 制备 重组腺相关病毒载体 衰老模型小鼠 模型小鼠 衰老进程 小鼠血 滴度 构建 小鼠 血铅 质粒 延缓 感染 应用 | ||
【主权项】：
1.一种携带人金属硫蛋白基因的脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将人金属硫蛋白基因连接到腺相关病毒载体pAAV‑MCS上，得到携带金属硫蛋白基因的重组腺相关病毒载体pAAV‑MCS‑hMT，鉴定金属硫蛋白基因已连接到腺相关病毒载体上；(2)利用磷酸钙共沉淀法将重组腺相关病毒载体pAAV‑MCS‑hMT、包装质粒pAAV‑RC、辅助质粒pHelper共转染到AAV‑293细胞中，培养至AAV‑293细胞出现表型变化和毒性反应,完成重组腺相关病毒株rAAV‑hMT的包装；(3)收集细胞悬液，采用反复冻融方法，收集含有重组腺相关病毒株rAAV‑hMT的上清液，纯化并测定rAAV‑hMT毒株的滴度；(4)重组腺相关病毒rAAV‑hMT感染脐带间充质干细胞，得到携带有金属硫蛋白基因的脐带间充质干细胞；所述人金属硫蛋白基因经EcoR I和Xho I双酶切后插入pAAV‑MCS,构成重组腺相关病毒载体pAAV‑MCS‑hMT；所述步骤(4)重组腺相关病毒rAAV‑hMT感染脐带间充质干细胞的步骤为：将重组腺相关病毒rAAV‑hMT按20MOI加入第2代对数生长期脐带间充质干细胞培养液中，5％CO2，37℃细胞培养箱培养24小时。
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