[发明专利]一种总核酸、总RNA和基因组DNA的同步提取方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，涉及一种总核酸、总RNA和基因组DNA的同步提取方法，是将植物材料粉碎后用SDS提取液进行提取，得到粗提物上清液，三等分粗提物上清液后分别用于总核酸、总RNA和基因组DNA的提取。本发明将SDS提取液与其它试剂相结合，可以同步提取总核酸、总RNA和基因组DNA，不仅节约了时间，而且节约了提取成本，可以满足多种分子生物学研究的需要，具有现实意义。

主权项

一种总核酸、总RNA和基因组DNA的同步提取方法，其特征在于，其步骤如下：1）、粗提将植物材料粉碎后与SDS提取液混合，60～70℃水浴10～60分钟；离心，取上清得到粗提物上清液，三等分粗提物上清液后分别用于总核酸、总RNA和基因组DNA的提取；2）、提取总核酸的提取：在粗提物上清液中加入水饱和酚与氯仿组成的混合试剂，混匀，离心，取上清液，重复此步至无中间相；在上清液中加入2倍体积的无水乙醇和1／10体积的醋酸钠溶液，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上；离心，弃上清，沉淀物用75 %乙醇洗涤1～5次，室温干燥，得到包含总RNA和基因组DNA的总核酸；所述水饱和酚与氯仿组成的混合试剂中水饱和酚与氯仿的体积比为1︰1；所述醋酸钠溶液的浓度为3～5 mol／L，pH值为5.2；总RNA的提取： 在粗提物上清液中加入1／5～5／5体积的醋酸钾溶液，混匀，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上，离心，取上清，得到第一次提取上清液；在第一次提取上清液中加入水饱和酚与氯仿组成的混合试剂，混匀，离心，取上清液，重复此步至无中间相，得到第二次提取上清液；在第二次提取上清液中加入2倍体积的无水乙醇和1／10体积的醋酸钠溶液，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上，离心，弃上清，沉淀物用75 %乙醇洗涤1～5次，室温干燥，得到总RNA；所述水饱和酚与氯仿组成的混合试剂中水饱和酚与氯仿的体积比为1︰1；所述醋酸钠溶液的浓度为3～5 mol／L，pH值为5.2；基因组DNA的提取：在粗提物上清液中加入1／10～1／2体积无水乙醇，混匀，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上，离心，取上清，得到第一次提取上清液；在第一次提取上清液中加入Tris‑饱和酚与氯仿组成的混合试剂， 混匀，离心，取上清，重复此步至无中间相，得到第二次提取上清液；在第二次提取上清液中加入2倍体积的无水乙醇和1／10体积的醋酸钠溶液，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上，离心，弃上清，沉淀物用75 %乙醇洗涤1～5次，室温干燥，得到基因组DNA；所述Tris‑饱和酚与氯仿组成的混合试剂中Tris‑饱和酚与氯仿的体积比为1︰1；所述醋酸钠溶液的浓度为3～5 mol／L，pH值为5.2。