[发明专利]建立单克隆间充质干细胞的方法及其应用有效
| 申请号： | 201310253266.2 | 申请日： | 2013-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN104232570B | 公开（公告）日： | 2017-08-25 |
| 发明（设计）人： | 张文炜 | 申请（专利权）人： | 张文炜 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;A61K35/28;A61P7/00;A61P37/00;A61P25/00;A61P3/10;A61P9/00;A61P19/00 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提出了构建单克隆间充质干细胞的方法及其应用。分离间充质干细胞的方法，包括A）利用胶原酶对动物样本进行消化，以便分散所述动物样本中所包含的细胞，以便获得包含干细胞的细胞混合物；B）将编码报告蛋白的核酸分子引入所述细胞混合物的至少一部分细胞中，其中，所述编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启动子可操纵地相连，以便在间充质干细胞中表达所述报告蛋白；以及C）利用FACS，分选获得表达所述报告蛋白的间充质干细胞，其中，所述间充质干细胞呈单个细胞的形式。利用该方法能够有效地制备单个细胞形式的间充质干细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 建立 单克隆 间充质 干细胞 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种分离间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：A)利用胶原酶对动物样本进行消化，以便分散所述动物样本中所包含的细胞，以便获得包含干细胞的细胞混合物；B)利用液体培养基对所述细胞混合物进行培养；将构建体引入所述培养获得的贴壁细胞中，其中，所述构建体包括编码报告蛋白的核酸分子以及间充质干细胞特异性启动子，所述编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启动子可操纵地相连，以便在间充质干细胞中表达所述报告蛋白；所述间充质干细胞特异性启动子为人NANOG启动子，其基因序列如SEQ ID NO:1所示；以及C)利用FACS，分选获得表达所述报告蛋白的间充质干细胞，其中，所述间充质干细胞呈单个细胞的形式。
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