[发明专利]一种用于检测氧化应激标志物d-ROMs的体外检测方法

摘要

本发明公开了一种通过检测血液中总的活性氧代谢物(ROMs)含量从而评价人体内整体氧化应激水平的应用方法，该方法包括：将含有ROMs的血清加入酸缓冲液配制的芳香胺(DMPD)，二价铁及三价铁在酸缓冲液中从血清蛋白中释放；ROMs的主要成分过氧化氢物(ROOH)与二价铁及三价铁反应，生成烷氧自由基(RO^*)和过氧化自由基(ROO^*)；自由基氧化DMPD，生成粉红色产物；产物用自动生化仪505nm波长读数，读取OD值与ROMs浓度呈比例。本发明检测ROMs的方法为一步法，测定仪器为临床生化诊断最基本的和必备的生化分析仪，具有操作简便、精密度高、重复性好等优点。针对ROMs的氧化应激分析可作为治疗方案制定或预后判断等的依据，具有相当重要的临床意义。

主权项

一种操作简单、成本低廉、成功率高的检测ROMs的方法，其特征在于，该方法包括：1)全血离心，分离血清和血细胞；2)取适量步骤1)中血清，加入Tris酸缓冲液配制的适宜浓度的芳香胺(DMPD，N，N‑二甲基对苯二胺二盐酸盐)溶液；3)血清中二价铁及三价铁在酸缓冲液中从血清蛋白中释放，过氧化氢物(ROOH)与二价铁及三价铁反应，生成烷氧自由基(RO^*)和过氧化自由基(ROO^*)；4)步骤3)中生成的烷氧自由基(RO^*)和过氧化自由基(ROO^*)将芳香胺氧化，生成粉红色产物；5)粉红色产物用波长为505nm的自动生化分析仪读数，颜色强度与读取OD值(ROMs浓度)呈比例。6)在以上步骤进行的同时，步骤1)中血清以不同浓度的H₂O₂代替，余步骤不变，以不同浓度H₂O₂反应产物读取的OD值做标准曲线，由此计算出血清中过氧化氢物(ROOH)相当于H₂O₂的浓度。