[发明专利]一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法

摘要

本发明属生物化学领域，涉及一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法。本方法基于能量转移均相时间分辨荧光共振的高通量检测技术，用于快速寻找化合物靶蛋白。本方法无需质谱分析及蛋白纯化检测化合物与蛋白质结合的测量，达到了与高通量筛选兼容。与传统的利用亲和柱的药物蛋白靶检测技术比较，本方法中加入药物无需裂解细胞，不需经过洗涤过程，从而降低传统生化方法产生的假阳性。本方法具有灵敏度高、重复性好、操作相对简便的特点，可用于化合物的体外蛋白靶点的高通量筛选，以及医药产业界筛选疾病蛋白结合的化合物，及学术界对与待定蛋白功能结构域的化合物筛选等。

主权项

一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法，其特征在于，其包括将待测化合物标记后，与人类全基因组表达的蛋白文库进行亲和力检测，按下述步骤：(1)构建携带荧光标签的蛋白文库，运用构建的人类全基因库，为每组基因增加荧光标签，构建全基因组的基因过表达质粒，形成蛋白文库，所述的荧光标签是HA‑lag；(2)为待检测化合物增添可识别的标签；(3)将构建的步骤(2)待测化合物与步骤(1)的蛋白文库进行共孵育，使所述的化合物与文库蛋白充分的结合；(4)利用均相时间分辨荧光共振原理(HTRF)检测加标签化合物和文库蛋白的结合能力。