[发明专利]一种层层自组装法双重修饰脂质体的制备方法

摘要

一种层层自组装法双重修饰脂质体的制备方法，是以卵磷脂和胆固醇为壁材，采用薄膜分散-动态高压微射流法制备得到纳米脂质体，进一步采用层层自组装技术，以壳聚糖分子链上的伯氨基为正电荷，海藻酸钠中分子链上的羧基为负电荷，通过正、负电荷静电作用层层交替形成聚电解质膜组装在纳米脂质体模板表面，从而制备海藻酸钠、壳聚糖双重修饰脂质体。本发明制备的双重修饰脂质体平均粒径为330.6±37.3nm，zeta电位为-15.79±0.697mV，分布系数为0.65±0.048，体外消化实验表明双重修饰脂质体体外消化稳定性优于未修饰脂质体：双重修饰脂质体包裹的荧光物质钙黄绿素在消化120min后释放率仅为38±2%，而未修饰脂质体为58±2%。

主权项

一种层层自组装法双重修饰脂质体的制备方法，其特征在于：（1）各原料的重量百分比为：卵磷脂为4.0%‑8.0%，胆固醇为0.8%‑1.2%，吐温‑80为1.5%‑2.5%，维生素E为0.1%‑0.3%，其余的是浓度为0.05M的磷酸盐缓冲溶液即PBS，为86.0%‑93.1%，此外使用的壳聚糖和海藻酸钠溶液浓度分别为0.6%，0.5%；（2）按上述重量百分比称取卵磷脂、胆固醇、吐温‑80和维生素E，在40℃条件下，先用0.206g卵磷脂溶于10ml无水乙醇后，完全溶解各组分；（3）将步骤（2）中所得溶液于真空旋转蒸发仪上除去无水乙醇，形成均匀薄膜；（4） 按8%脂质浓度即卵磷脂与胆固醇总量占缓冲溶液体积的百分比，加入30mlpH7.4、0.05M的磷酸盐缓冲溶液即PBS洗膜，形成粗脂质体悬浊液；（5）用动态高压微射流即DHPM处理步骤（4）得到的粗脂质体悬浊液，压力为120MPa，处理次数为2次，得纳米脂质体；（6）将步骤（5）得到的纳米脂质体按照体积比1：1，逐滴加入至0.6%的壳聚糖即CH溶液中，利用HCl、NaOH稀溶液调节pH至5.5，室温搅拌1h后静置1h，得到第一层修饰的壳聚糖‑脂质体即CH‑L；（7）将步骤（6）得到的CH‑L按照体积比1:1逐滴加入到0.5%的海藻酸钠即AL溶液中，利用HCl、NaOH稀溶液调节pH至5.5，室温搅拌1h后静置1h，3000g离心15min除去沉淀，过滤得到双重修饰的海藻酸钠‑壳聚糖‑脂质体即AL‑CH‑L。