[发明专利]以改性聚氯乙烯为载体的高活力固定化蛋白酶的制备方法

摘要

本发明属于固定化酶领域，公开了一种以改性聚氯乙烯为载体的高活性固定化蛋白酶及其制备方法。本方法通过聚氯乙烯的胺化、胺化聚氯乙烯的活化、复合蛋白酶的固定化的过程，制备高活性固定化蛋白酶。本发明制备的固定化蛋白酶具有耐水、坚韧质轻的特点，从而有效扩大了固定化蛋白酶的适用范围，其最高蛋白酶活力可达1310±55U/g，是普通固定化蛋白酶的2.5-25倍，重复使用5次，仍可保持60%以上的活性。

主权项

以改性聚氯乙烯为载体制备高活力固定化蛋白酶的方法，其特征在于，方法如下：步骤a：将聚氯乙烯粉末和体积分数为3%~5%的乙二胺溶液，按质量体积比1﹕20，加入恒温搅拌反应器中，反应器温度为50~80℃，搅拌反应90min；反应结束后以蒸馏水洗涤，去除多余的乙二胺，30~50℃恒温干燥获得胺化聚氯乙烯粉末；步骤b：将步骤a所得的胺化聚氯乙烯粉末和体积分数为2%~3%的戊二醛溶液，按质量体积比1﹕30，加入恒温搅拌反应器中，在50℃下搅拌反应45min；反应结束后以蒸馏水洗涤，去除多余的戊二醛，得已活化的胺化聚氯乙烯；步骤c：用pH=7的低盐缓冲液和混合蛋白酶粉配制混合蛋白酶酶液，质量体积比为2~3mg/mL；步骤d：将步骤b所得的已活化的胺化聚氯乙烯和步骤c所得的混合蛋白酶酶液，按质量体积比1﹕10，加入恒温搅拌反应器中；设置反应器温度为15~25℃，搅拌反应60~90min；搅拌反应完成后，4℃恒温放置6h；用蒸馏水和pH=7.0低盐缓冲液各洗涤固定化蛋白酶1遍；真空冷冻干燥12h获得固定化混合蛋白酶粉末。