[发明专利]一种斑点叉尾鮰物种的鉴定方法无效
| 申请号： | 201310313699.2 | 申请日： | 2013-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN103409516A | 公开（公告）日： | 2013-11-27 |
| 发明（设计）人： | 罗志萍;王华全;肖武汉 | 申请（专利权）人： | 罗志萍 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 杨立 |
| 地址： | 430050 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种斑点叉尾鮰物种的鉴定方法，包括以下步骤：提取斑点叉尾鮰肌肉组织中的基因组DNA；在线粒体DNA D-loop控制区设计PCR引物；将基因组DNA在PCR引物的作用下进行PCR扩增，得到线粒体DNA D-loop序列；利用限制性内切酶EcoR Ⅰ对线粒体DNA D-loop序列在37℃的温度下酶切2～3小时；将酶切后的线粒体DNA D-loop序列进行琼脂糖凝胶电泳，通过电泳的结果，鉴定出斑点叉尾鮰物种。本发明在对D-loop测序的基础上，寻找其酶切位点，并进行酶切鉴定，不需测序即可简单地鉴定出斑点叉尾鮰物种。本发明从分子水平鉴定斑点叉尾鮰物种，操作简单易行，所耗时间短暂，极其适合对出入境的斑点叉尾鮰物种进行鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 斑点 叉尾鮰 物种 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种斑点叉尾鮰物种的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1）采用酚－氯仿法提取斑点叉尾鮰肌肉组织中的基因组DNA；2）在斑点叉尾鮰线粒体DNA D‑loop控制区设计PCR引物，其核苷酸序列为：正向：5’‑GTCGCCTCCGTACTGTATTTCTCC‑3’，反向：5’‑GGGTCCATCTTAACATCTTCAGTG‑3’；3）将步骤1）所得的基因组DNA在步骤2）设计的PCR引物的作用下进行PCR扩增，得到线粒体DNA D‑loop序列；再将线粒体DNA D‑loop序列进行琼脂糖凝胶电泳，通过电泳的结果初步鉴定斑点叉尾鮰物种；4）利用限制性内切酶EcoR Ⅰ对所述步骤3）所得的线粒体DNA D‑loop序列在37℃的温度下酶切2～3小时；5）将经过步骤4）酶切后的线粒体DNA D‑loop序列进行琼脂糖凝胶电泳，通过电泳的结果最终鉴定出斑点叉尾鮰物种。
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