[发明专利]艰难梭菌毒素基因多重荧光PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供了一种艰难梭菌毒素基因多重荧光PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，所述特异性引物和探针由艰难梭菌毒素A（tcdA）、毒素B（tcdB）、二元毒素A（cdtA）和二元毒素B（cdtB）的特异性引物和探针组成；本发明的有益效果主要体现在：本发明针对艰难梭菌毒素基因提供了一种快速、敏感、特异的多重荧光PCR检测试剂盒和检测方法，为区分艰难梭菌产毒株与无毒株、及其艰难梭菌感染的早期诊断提供了基础。

主权项

一种艰难梭菌毒素基因多重荧光PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，所述特异性引物和探针由艰难梭菌毒素A（tcdA）、毒素B（tcdB）、二元毒素A（cdtA）和二元毒素B（cdtB）的特异性引物和探针组成，其特征在于所述特异性引物和探针序列如下：tcdA上游引物:5′‑TCAGGAGTTGTTAAATCGTGGAAA‑3′；tcdA下游引物:5′‑CAGAGTGAATACCTGGAAGCATATCA‑3′；tcdA荧光探针:5′‑FAM‑CTGCAGCATCTGACATAG‑BHQ1‑3′；tcdB上游引物:5′‑GATAATATTTACGGACAAGCAGTTGACT‑3′；tcdB下游引物:5′‑AGTCTCAATTGTATAGGTTTCTCCAAAA‑3′；tcdB荧光探针:5′‑VIC‑AGCGGTTTAGTTAGAGTTG‑BHQ1‑3′；cdtA上游引物:5′‑TGGGAAGCACTATATTAAAGCAGA‑3′；cdtA下游引物:5′‑ACATCAGCAAGTTCATTAGGTGTT‑3′；cdtA荧光探针:5′‑ROX‑TTTGCTTTACCCCAAGARTCCCCCT‑BHQ2‑3′；cdtB上游引物:5′‑ATTTCTTTGACCCAAAGTTGATG‑3′；cdtB下游引物:5′‑CCCACTTAACTGCAATTAAGTCC‑3′；cdtB荧光探针:5′‑CY5‑TGATTGGGAAGACGAAGATTTGGAT‑BHQ2‑3′；其中FAM、VIC、ROX和CY5为不同波长的荧光报告基团，BHQ1和BHQ2为荧光淬灭基团。