[发明专利]一种蜡蚧菌蛋白酶分离纯化的方法

摘要

本发明公开了一种蜡蚧菌蛋白酶分离纯化的方法。将蜡蚧菌孢在优化后的产酶培养基中发酵，经超滤浓缩、硫酸铵盐析、DEAESepharosefastflow阴离子交换柱层析和SephadexG-150分子筛层析等步骤于发酵液获得了SDS-PAGE电泳均一的蜡蚧菌蛋白酶，本工艺特异性高，工艺简单，蛋白质不易失活，纯化效果好，回收率高，成本低，具有很好的推广应用价值。

主权项

一种从蜡蚧菌分离纯化蛋白酶的方法，其特征在于包括以下步骤：（a）粗酶液的制备: 用培养基培养蜡蚧轮枝菌L. lecanii FJ28菌株，在培养发酵液中在蛋白酶活性达最高时取发酵液离心，上清液用真空抽滤，收集滤液；向滤液中加入固体硫酸铵至饱和度为60%wt，4℃静置过夜；再次离心收集沉淀，用缓冲液溶解沉淀；离心溶解液除去不溶物体，上清液装于透析袋，经缓冲液透析后，再用聚乙二醇浓缩得到粗酶液；DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱层析: 粗酶液上样于用缓冲液平衡过夜充分平衡后的DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱层析，再用含0‑1mol/L NaCl的0.02mol/L Tris‑HCl缓冲液pH=8.0缓冲液进行连续洗脱,收集具有酶活性部份；Sephadex G‑150分子筛层析: 用缓冲液充分平衡Sephadex G‑150分子筛层析柱，将步骤(b)收集的收集具有酶活性部份上于其中，再用缓冲液进行洗脱；收集有酶活性的部份；步骤 （a）、（b）、（c）中缓冲液为缓冲液为0.02mol/L Tris‑HCl缓冲液pH=8.0。