[发明专利]双离子交换层析分离纯化眼镜蛇神经毒蛋白的方法及制剂有效
| 申请号： | 201310320887.8 | 申请日： | 2013-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN103387610A | 公开（公告）日： | 2013-11-13 |
| 发明（设计）人： | 吕秋敏;石聪博 | 申请（专利权）人： | 奔驰生物科技（云南）有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C07K1/18;A61K38/17;A61P29/00 |
| 代理公司： | 昆明合众智信知识产权事务所 53113 | 代理人： | 朱玉丹 |
| 地址： | 650000 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 双离子交换层析分离纯化眼镜蛇神经毒蛋白的方法，步骤如下：（1）第一次离子交换层析分离纯化：a）眼镜蛇粗毒的溶解：b）SP-Sephodex-C25凝胶柱分离纯化。（2）第二次离子交换层析分离纯化：a）SourceS(XK5030)柱：柱体积500ml，用A液1000毫升平衡柱子备用；b）SourceS(XK5030)柱纯化，按标准纯化图谱收集二次纯化的眼镜蛇神经毒蛋白。本发明工艺科学合理，在生产中不使用有机试剂，不使用高浓度盐，不使用任何蛋白修饰方法，最大限度地保存科博肽的生物学活性。本发明的工艺先进，操作简单，可大大缩短生产周期，节约生产时间，降低生产成本，完全适合工业化生产线的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 离子交换 层析 分离 纯化 眼镜蛇 神经 蛋白 方法 制剂 | ||
【主权项】：
双离子交换层析分离纯化眼镜蛇神经毒蛋白的方法，其特征在于，对蛇毒进行两次离子交换层析纯化，步骤如下： （1）第一次离子交换层析分离纯化：a）眼镜蛇粗毒的溶解：配制0.02M的磷酸盐缓冲液为A液，配制含0.8M NaCl的A液为B液；称取眼镜蛇粗毒，用A液溶解，离心取上清液为蛇毒液，备用；b）SP‑Sephodex‑C25凝胶柱分离纯化：将SP‑Sephodex‑C25凝胶用0.3N NaOH浸泡，用纯水洗至中性，抽干取出置烧杯中加A液抽气，取出装于XK‑5030柱中，用A液平衡，将上述离心好的蛇毒液加入SP‑Sephodex‑C25凝胶柱中，流速为8‑12ml/分，用A液进行洗脱，再用15‑35%梯度进行梯度洗脱，然后用100% B液洗脱，最后用A液600ml平衡柱子，按标准分离纯化图谱收集一次纯化的眼镜蛇神经毒蛋白，备用； （2）第二次离子交换层析分离纯化：a）Source S(XK5030)柱： 柱体积500ml,用A液1000毫升平衡柱子备用;b）Source S(XK5030)柱纯化： 将步骤（1）得到的神经毒蛋白用A液稀释三倍，流速为10ml/分，直接加入Source S(XK5030)柱中，再用10‑35%梯度的A液 B液3000ml进行梯度洗脱，然后用100% B液200ml洗脱，最后用A液600ml清洗柱子，按标准纯化图谱收集二次纯化的眼镜蛇神经毒蛋白。
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