[发明专利]一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法，步骤如下：1）外植体的选择；2）外植体灭菌；3）新发枝条诱导培养；4）增殖培养；5）壮苗培养；6）瓶外生根。本发明的有益效果是：（1）建立了利用已开花嫩茎段为外植体的马缨杜鹃组培快繁方法，成功解决外植体难灭菌、易褐化的技术难题；（2）通过本发明的组培快繁方法繁育的马缨杜鹃在半年内增殖系数为100-150倍，瓶外生根率达85-90%，极大提高了马缨杜鹃的繁殖系数，为该物种的保存和产业化提供了可靠有效的繁殖方法。

主权项

一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：1）外植体的选择：春季或秋季从已开花马缨杜鹃母株上剪取带有4‑6个潜伏芽的当年生新发枝条；2）外植体灭菌：剪去枝条叶片，先用自来水浸泡并冲洗30‑60分钟，用洗洁精洗涤1‑2次后吸干；然后，在无菌室超净台上用75%酒精消毒15‑30秒，用无菌水冲洗3‑5遍，再用0.1％氯化汞消毒12‑15分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3‑5遍后吸干；3）新发枝条诱导培养：将灭好菌的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成2‑3cm长的茎段，每段带有1‑2个腋芽，斜插入诱导培养基中；于23‑26℃光16小时，黑8小时培养25‑35天后，茎段潜伏芽发育生长出新枝条至2‑4cm长；所述的诱导培养基由以下组分构成：WPM基本培养基 + ZT 3.0‑4.0 mg/L + NAA0.2‑0.4 mg/L + 20 g/L 蔗糖或白糖 + 6‑10 g/L 琼脂，pH4.8‑5.2，高温灭菌；4）增殖培养：剪取新长出的枝条，去顶芽后插入增殖培养基中，于23‑26℃光16小时，黑8小时，培养45‑60天后，茎段长出丛生芽；此阶段可重复进行；所述的增殖培养基由以下组分构成： WPM基本培养基 + ZT 1.0‑2.0 mg/L + NAA 0.1‑0.2 mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6‑10 g/L 琼脂，pH 4.8‑5.2，高温灭菌；5）壮苗培养：将长到1‑2cm长的丛生芽剪切移入壮苗培养基中，于23‑26℃光16小时/黑8小时，培养25‑35天，待长到3‑5cm后移入基质中，进行瓶外生根；所述的壮苗培养基由以下组分构成：WPM基本培养基 + ZT 0.5‑1.0 mg/L + NAA0.05‑0.1 mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6‑10 g/L 琼脂，pH 4.8‑5.2，高温灭菌；6）瓶外生根：在每年10至次年3月，将长到3‑5 cm高的瓶苗在室外放置1周，洗去枝条上的琼脂后移入含有含泥炭：珍珠岩：蛭石体积比2：1：1的基质中，在保湿保温条件下生长，1‑2个月后生根。