[发明专利]一种检测特异性重组人胰岛素大肠杆菌残留宿主蛋白的方法有效
| 申请号： | 201310326398.3 | 申请日： | 2013-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN103439512A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 冷春生 | 申请（专利权）人： | 通化东宝药业股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京递进知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11414 | 代理人： | 田丰 |
| 地址： | 134123 吉林省通*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种检测特异性重组人胰岛素大肠杆菌残留宿主蛋白的方法，该方法是以整合了人胰岛素基因的pZRHi-1质粒的大肠杆菌发酵液超滤制备的宿主总蛋白作为抗原，刺激家兔产生抗体，继而采用固定了人胰岛素的亲和色谱法祛除其中人胰岛素抗体，制备特异性抗体，再对其用辣根过氧化物酶标记后采用双抗体夹心法对待测样品进行残留宿主蛋白的检测；该方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可有效控制RHI产品质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 特异性 重组 胰岛素 大肠杆菌 残留 宿主 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种检测特异性重组人胰岛素大肠杆菌残留宿主蛋白的方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：（1）取含有整合了人胰岛素基因的pZRHi‑1质粒的大肠杆菌发酵液，进行组织破碎，得到破碎液；（2）将步骤（1）得到的破碎液超滤，得到宿主细胞总蛋白；（3）将步骤（2）得到的宿主细胞总蛋白对家兔进行皮下注射免疫；（4）取免疫后的家兔血清，采用G蛋白亲和色谱柱进行纯化，得到纯化血清抗体；（5）使人胰岛素与CNBr活化的Sepharose4Fastflow色谱柱填料偶联，处理后得到人胰岛素亲和色谱柱；（6）将步骤（4）得到的纯化血清抗体通过步骤（5）制得的人胰岛素亲和色谱柱进行纯化，制得特异性抗体；（7）将步骤（6）得到的特异性抗体用辣根过氧化物酶标记，得酶标抗体；（8）按照双抗体夹心法对待测样品进行测定，得到待测样品大肠杆菌残留宿主蛋白的含量。
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