[发明专利]一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法

摘要

本发明公开了一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法。本发明通过解决亲本选择授粉、种子无菌播种预处理提高萌发率、提高根状茎增殖率、提高根状茎分化率、加快种苗的生长及提高种苗生根率、提高种苗移栽成活率等关键技术而实现了本发明的目的。本发明中种子萌发快，萌发率高，根状茎分化的芽数多，芽生根好，种苗品质好，能快速获得大量试管苗，成苗的移栽成活率达90%以上，因此能为建兰的种苗生产提供一条有效的途径。

主权项

一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）人工授粉：选取生长健壮且带叶艺或花艺的建兰（Cymbidium ensifolium）为亲本，花开2～10天内进行人工授粉，授粉前后将整朵花套授粉袋，授粉后将亲本的唇瓣去掉；（b）无菌播种和种子预处理：待杂交蒴果7‑8分成熟且未开裂时采下，消毒处理，将消毒后的蒴果在无菌纸上纵切，将其粉末状的种子悬浮于无菌水中，超声清洗5～10min，然后将清洗后的种子悬浮液均匀滴播在种子萌发培养基培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，种子在萌发培养基上萌发形成根状茎，所述的种子萌发培养基为：每升含有肌醇80‑120mg、萘乙酸0.5‑2.0mg、椰子汁50‑200ml、香蕉汁50‑100g、活性炭1‑2g、蔗糖15‑20g、琼脂5‑6g，其余为ZJ1培养基，pH 5.5～5.7；（c）根状茎繁殖：将根状茎培养在增殖培养基上培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，根状茎大量增殖，所述的增殖培养基为：每升含有肌醇80‑120mg、萘乙酸0.2‑2.0mg、苄氨基腺嘌呤0.5‑3.0mg、活性炭1‑2.0g、香蕉50‑150g、蔗糖10‑20g、琼脂5‑6g、其余为MS培养基，pH 5.5～5.7；（d）根状茎分化芽：将步骤（c）得到的长1～2cm的根状茎培养在分化芽培养基上，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，根状茎上分化出芽，所述的分化芽培养基为：每升含有肌醇80‑120mg、萘乙酸0.05‑1.0mg、噻苯隆0.5‑2mg、椰子汁50‑150ml、蔗糖10‑20g、琼脂5‑6g，其余为ZJ2培养基，pH 5.5～5.7；（e）壮苗生根培养：将根状茎分化而得的芽接种培养在壮苗生根培养基中培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，所述的壮苗生根培养基为：每升含有肌醇80‑120mg、萘乙酸0.05‑2.0mg、吲哚丁酸0.05‑1.0mg、蛋白胨0.5‑2.0mg、椰 子汁50‑100ml、香蕉汁50‑100g、活性炭0.5‑2g、蔗糖10‑20g、琼脂5‑6g，其余为ZJ2培养基，pH 5.5～5.7；（f）试管苗移栽：当步骤（e）的苗长至6‑9cm高且有2‑4条根时，在自然光下炼苗15～30天，然后取出植株洗净根部的培养基，移入混合栽培基质中，所述的混合栽培基质为：兰石：树皮：木屑质量比为1：0.5～1：0.5～2，移栽后马上消毒，常规培养管理，由此得到种苗；所述的ZJ1培养基为每升含有：硝酸铵160‑200毫克，磷酸二氢钾80‑100毫克，氯化钾160‑200毫克，硫酸镁80‑100毫克，硝酸钙80‑100毫克，硫酸锌1‑3毫克，硼酸1‑3毫克，硫酸锰0.1‑0.5毫克，硫酸铜0.03‑0.05毫克，氯化镍0.03‑0.05毫克，碘化钾0.01‑0.05毫克，硫酸亚铁16‑20毫克，维生素C 30‑50毫克，烟酸8‑10毫克，盐酸硫胺素3‑5毫克，盐酸吡哆醇0.3‑0.5毫克，谷氨酸0.3‑0.5毫克，钴胺素0.5‑1毫克，视黄醇1000‑3000I.U，钙化醇800‑1000I.U，其余为水；所述的ZJ2培养基为每升含有：硝酸铵200‑250毫克，磷酸二氢钾100‑120毫克，氯化钾200‑250毫克，硫酸镁100‑120毫克，硝酸钙100‑120毫克，硫酸锌2‑6毫克，硼酸2‑6毫克，硫酸锰0.2‑1.0毫克，硫酸铜0.06‑0.1毫克，氯化镍0.06‑0.1毫克，碘化钾0.06‑0.1毫克，硫酸亚铁20‑25毫克，维生素C 30‑50毫克，烟酸8‑10毫克，盐酸硫胺素3‑5毫克，盐酸吡哆醇0.3‑0.5毫克，谷氨酸0.3‑0.5毫克，钴胺素0.5‑1毫克，视黄醇1000‑3000I.U，钙化醇800‑1000I.U，其余为水。