[发明专利]用于嗜酸硫化芽孢杆菌硫氧化还原酶基因同源表达的方法

摘要

用于嗜酸硫化芽孢杆菌硫氧化还原酶基因同源表达的方法，涉及嗜酸硫化芽孢杆菌。可以在嗜酸硫化芽孢杆菌中实现硫氧化还原酶基因的同源表达。还提供一种大肠杆菌和嗜酸硫化芽孢杆菌接合转移进行质粒转化的方法，该方法克服了大肠杆菌和嗜酸硫化芽孢杆菌生长条件的巨大差异。采用的菌株属于中等嗜热菌的嗜酸硫化芽孢杆菌，具有潜在的开发应用价值。首次在嗜酸硫化芽孢杆菌中实现了硫氧化还原酶基因的同源表达。

主权项

用于嗜酸硫化芽孢杆菌硫氧化还原酶基因同源表达的方法，其特征在于包括以下步骤：1）从嗜酸硫化芽孢杆菌(Sulfobacillus acidophilus)TPY的基因组GenBank Accession Number为CP002901，克隆硫氧化还原酶基因sor，在基因组中的标签为0405，硫氧化还原酶氨基酸序列为：MPVPYIAVNKARVLNAPSSFETFTSVGPKVCMVTANHEGFVGFQNHVQVGVFPMGGRYG AAKMDMHEELNPIGIVQYTMWRHWEDHEAMHYENFDSIFRLCSQCLNMVVEGPWEPLYE IVAHDLPENVSMTDVPAALGAAWMAGQPVPAVSLPYGQRIVAASDHTVIPGREKDFEQAI VDVMTAFKKAPGFLGYMVMKQIGASAIGAMQLTPQGIHQALQTRGDNPPRDKEGNFQPM QAHSSPQEYVVHMEWADMNSAMMGISRVVVNHKMRMIHDRVLETVLKGPYVTLWNPIM EDTSWREYLHS；将获得的硫氧化还原酶基因sor克隆到表达载体pTrc99A中构建质粒pTrc99A‑sor；所述嗜酸硫化芽孢杆菌(Sulfobacillus acidophilus)TPY已于2010年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M2010203；2）从质粒pEx18Tc克隆接合转移元件oriT连入pTrc99A‑sor构建表达载体pTrc99A‑sor‑oriT，将构建好的重组质粒pTrc99A‑sor‑oriT转化至大肠杆菌S17‑1(E.coli S17‑1)中,以构建供体菌E.coli S17‑1(pTrc99A‑sor‑oriT)；3）37℃下将供体菌和嗜酸硫化芽孢杆菌(Sulfobacillus acidophilus)TPY在接合培养基上共培养，将质粒pTrc99A‑sor‑oriT接合转移到嗜酸硫化芽孢杆菌(Sulfobacillus acidophilus)TPY中，利用氨苄青霉素筛选工程菌嗜酸硫化芽孢杆菌TPY‑SOR，将该工程菌在以Fe2SO4为能源的SA液体培养基中50℃振荡培养至对数期，利用Western Blot检测目的蛋白SOR的表达情况。