[发明专利]一种鉴定药用植物三叶青的方法

摘要

本发明提供一种鉴定药用植物三叶青的方法，通过三叶青的特异性核苷酸序列以及基于该序列的特异性引物，利用PCR技术鉴定三叶青。本发明设计的引物，具有极高的专一性，在12个不同种源的三叶青中均可扩增出1800bp左右条带，与16个近缘物种和三叶青伪品土圜的DNA均不反应，可以快速、准确地鉴别三叶青。本发明方法用很少量样品即可完成整个鉴定操作，鉴定结果准确、灵敏度高，为药用植物三叶青的鉴定提供了客观、快速、准确的方法，解决了药材市场上伪品仿冒三叶青欺骗消费者的问题。

主权项

一种鉴定药用植物三叶青的方法，其特征是，通过以下步骤实现：（1）提供用于三叶青鉴定的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ NO 1所示，该核苷酸片段来源于ISSR通用引物UBC843扩增所得的三叶青特异性核苷酸序列，除ISSR引物结合位点外长1773bp，其中带下划线的部分49‑69bp和1748‑1766bp分别为本发明的三叶青聚合酶链反应引物Thk1和Thk2的结合位点；（2）提供来源于上述DNA片段的三叶青专一性聚合酶链反应引物，所述引物的核苷酸序列为：SEQ NO 2：5'‑TCGTATTTTCCTACTCTTGTT‑3' 或SEQ NO 3 ：5'‑CTCACTTTCTCCATCTTCG‑3'；（3）鉴定三叶青的方法：采用常规PCR法：以步骤（2）所述的PCR引物，进行PCR反应，具体步骤和过程按常规PCR方法的操作进行：94℃  5 min，（94℃  30 sec，61℃ 45 sec，72℃ 1.5 min，）循环35次，72℃ 10 min，4℃保温；若在分子量1800bp左右有条带出现，则为三叶青；若在分子量1800bp左右没有条带出现，则不是三叶青。