[发明专利]一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法，步骤包括：犊牛发生腹泻后病料的采集与标记；细菌的增菌，细菌的鉴定和选择性特殊培养基培养，菌体的处理；设计两对诊断性引物eaeA，P1：5’-CTGAACGGCGATTACGCGAA-3’，P2：5’-CCAGACGATACGATCCAG-3’，预期扩增出的目的片段大小，bfpA基因P1：5’-TGTATATTGGGCAGACC-3’，P2：5’-CAGGGCGTATTATGTAGA-3’，预期扩增出的目的片段大小；PCR扩增反应；记录革兰氏染色镜检结果，大肠杆菌在麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板生长结果，毒力基因eaeAPCR结果；将eaeA所测序列与GeneBank中的序列进行比对，对eae序列进行分析，对核苷酸序列分析；将蛋白序列在NCBI中进行比对，得到该蛋白的结构域。本发明结合传统大肠杆菌的选择性特殊培养对样品进行初步纯化，获得单菌落，可提高PCR检测的准确性，可行性强。

主权项

一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法，其特征在于，该犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法包括以下步骤：步骤一、犊牛发生腹泻后病料的采集与标记；步骤二、细菌的增菌，细菌的鉴定和选择性特殊培养基培养，菌体的处理；步骤三、设计两对诊断性引物eaeA，P1：5’‑CTGAACGGCGATTACGCGAA‑3’；P2：5’‑CCAGACGATACGATCCAG‑3’，预期扩增出的目的片段大小；bfpA基因，P1：5’‑TGTATATTGGGCAGACC‑3’；P2：5’‑CAGGGCGTATTATGTAGA‑3’，预期扩增出的目的片段大小；步骤四、PCR扩增反应；步骤五、记录革兰氏染色镜检结果，大肠杆菌在麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板生长结果，毒力基因eaeAPCR结果；步骤六、将eaeA所测序列与GeneBank中的序列进行比对，对eae序列进行分析，对核苷酸序列分析；步骤七、将蛋白序列在NCBI中进行比对，得到该蛋白的结构域。