[发明专利]一种利用黄鲫蛋白抗菌肽液热反应物分离前列腺癌PC-3抗癌肽的方法及其抗癌肽

摘要

本发明涉及一种利用黄鲫蛋白抗菌肽液热反应物分离前列腺癌PC-3抗癌肽的方法及其抗癌肽，其特征在于步骤为：1)制备黄鲫蛋白抗菌肽液，调节黄鲫蛋白抗菌肽液的pH值至5.0～7.0；2)对黄鲫蛋白抗菌肽液热处理，在100～121℃杀菌锅中加热30～60min，以制得黄鲫蛋白抗菌肽液的热反应产物；3)从黄鲫蛋白抗菌肽液热反应产物中分离抗癌肽。与现有技术相比，本发明的优点在于：以黄鲫蛋白抗菌肽液为出发底物，经二步凝胶分离，从黄鲫蛋白抗菌肽液的热反应产物中分离得到前列腺癌PC-3抗癌肽纯度高于94%，分子量小，易于人体吸收不易引起过敏反应。该抗癌肽的化学合成肽对前列腺癌PC-3肿瘤细胞的增殖抑制表现出剂量依赖特点，并且对PC-3肿瘤细胞有非常明显的诱导凋亡作用，能将细胞分裂阻滞于S期。

主权项

一种利用黄鲫蛋白抗菌肽液热反应物分离前列腺癌PC‑3抗癌肽的方法，其特征在于步骤为：1）制备黄鲫蛋白抗菌肽液，调节黄鲫蛋白抗菌肽液的pH值至5.0～7.0；2）对黄鲫蛋白抗菌肽液热处理，在100～121℃杀菌锅中加热30～60min，以制得抗癌型黄鲫蛋白抗菌肽液热反应产物；3）从黄鲫蛋白抗菌肽液热反应产物中分离前列腺癌PC‑3抗癌肽，上述黄鲫蛋白抗菌肽液热反应产物经Bio‑Gel P‑4凝胶色谱洗脱分离，上样量为柱体积的1～3%，以摩尔浓度20～200mM（含0.15～0.45mol/L NaCl）的磷酸盐缓冲液（pH值5.0～7.0）为洗脱剂，洗脱速度1.5～2.5mL/min，检测波长280nm，分别合并各个分离峰，旋转蒸发浓缩，冻干，测定各分离峰对前列腺癌PC‑3肿瘤细胞的增殖抑制率，将Bio‑Gel P‑4凝胶色谱分离的抗癌活性最高峰用交联葡聚糖G25凝胶色谱进行二次分离，上样量为柱体积的1～3%，去离子水洗脱同时实现脱盐处理，洗脱速度0.5～2.5mL/min，检测波长280nm，收集分离图谱中各分离峰，旋转蒸发浓缩，冻干，分别测定各分离峰对前列腺癌PC‑3肿瘤细胞的增殖抑制率，反复收集抗癌活性最高峰，经旋转蒸发浓缩，冻干，即得到所述抗癌肽粉。