[发明专利]一种检测黄牛Pax3基因单核苷酸多态性的PCR-RFLP方法与应用

摘要

本发明公开了一种快速检测黄牛Pax3基因单核苷酸多态性的PCR-RFLP方法。首先，根据DNA池测序结果，检测到的基因多态性包括：在黄牛的Pax3基因序列转录起始位点-580位T或G的单核苷酸多态性；在Taq DNA聚合酶、Buffer（缓冲环境）、Mg^＋＋、dNTPs存在的情况下，PCR扩增黄牛Pax3基因，分别用HinfI和HaeIII限制性内切酶消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳分型。本发明提供的检测方法为Pax3基因的SNP与生长性状关系的建立奠定了基础，以便用于中国黄牛生长性状的标记辅助选择，从而快速高效、精确地培育中国优质、特色的肉牛新品系。

主权项

一种检测黄牛Pax3基因的单核苷酸多态性的PCR‑RFLP方法，其特征在于，以中国地方黄牛基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg^＋＋、dNTPs存在的情况下，利用聚合酶链式反应引物P₁和P₂，进行PCR扩增，然后利用限制性内切酶对其进行酶切，再通过电泳检测即可准确鉴定黄牛单核苷酸多态性。所述的聚合酶链式反应引物P₁为：上游引物P₁‑F：5’‑CCCTTCTTTCCCCAGGTTAGAGAC‑3’24nt下游引物P₁‑R：5’‑GGGCTCGGGAGCATTTATT‑3’         19nt用限制性内切酶HinfI消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛的Pax3基因第‑580位的碱基多态性；所述的聚合酶链式反应引物P₂为：上游引物P₂‑F：5’‑GCGAAGAGGAGGAGACCGA‑3’     19nt下游引物P₂‑R：5’‑AGATTCCGAGGGACTGTGAG‑3’     20nt用限制性内切酶HaeIII消化PCR扩增产物之后，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛的Pax3基因第4617位的碱基多态性。