[发明专利]一种异源精子诱导泥鳅雌核发育四倍体鱼苗的方法

摘要

本发明公开了一种异源精子诱导泥鳅雌核发育四倍体鱼苗的方法，通过亲本的选取、精子的遗传灭活、雌核发育四倍体鱼苗的诱导，冷休克处理的方法获得了雌核发育四倍体鱼苗。本方法获得雌核发育四倍体泥鳅的受精率、孵化率和成活率最高可达：76.99±2.51%、54.54±1.87%、17.9±0.65%；本发明具有先进、高效、实用、可靠的特点，在泥鳅育种上具有重大的应用价值和广阔的应用前景。

主权项

一种异源精子诱导泥鳅雌核发育四倍体鱼苗的方法，其步骤如下：A、亲本的选取与人工催产选择体形正常、外表无伤、体质健壮、腹部膨大有弹性、卵巢轮廓明显的四倍体雌性泥鳅，雄性团头鲂胸鳍珠星明显、有粗糙感、轻压腹部有白色精液从生殖孔流出；B、精子的遗传灭活采集团头鲂精子，镜检选取活力在90%以上的用于紫外线灭活，团头鲂精液1ml，用Hank’s溶液按照1:4体积比稀释，置于经预冷的直径75mm干燥培养皿中，精液厚度为0.1‑0.2mm，然后置于2支15W紫外灯下处理；灯管与静液面距离10‑12mm，灭活时间20‑25min，精子的活力水平下降到30%时，停止光照，处理过的精液置于4℃冰箱中，避光保存备用；C、团头鲂精子诱导泥鳅雌核发育将稀释的精液200‑600µL 加入到含5‑30ml 四倍体泥鳅未受精卵的瓷盆中，混合均匀，随后加入5‑10ml 7% w/v 生理盐水，继续混匀后，加入50‑200ml 曝气水；D、冷休克处理：采用0‑4℃冰水混合物在授精后2‑10min进行冷休克处理，处理持续时间20‑55min；F.孵化受精卵经冷休克处理后，转移至23℃的水浴中复温；最后在曝气水中孵化；所述的曝气水为水温23‑25℃，溶氧6.0‑7.0mg/L，pH值在7.8‑8.2的自来水。