[发明专利]伪狂犬病毒疫苗的生产方法

摘要

本发明公开了一种伪狂犬病毒疫苗的生产方法，包括以下步骤：（1）取传代细胞系细胞，经消化传代，以细胞生长液在细胞培养瓶中继续培养；（2）将毒种用细胞维持液稀释10倍，接种细胞单层，收获感染细胞毒液，即为生产用毒种；（3）取步骤（1）中已形成的细胞单层，经消化制备为细胞悬液，接种于生物反应器中，在生物反应器中加入微载体；（4）对细胞进行接毒操作，所接入毒种为步骤（2）中生产的毒种；（5）待微载体上细胞全部脱落，且溶解氧值呈明显上升趋势，将反应器内液体连同微载体一起收获，置与-20℃条件下反复冻融2次，去除微载体及细胞碎片，制得伪狂犬病毒疫苗。本发明生产周期短、产量大。

主权项

一种伪狂犬病毒疫苗的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制苗用细胞的传代与培养：取细胞培养瓶中生长良好的传代细胞系细胞，经EDTA‑胰酶细胞分散液消化传代，以细胞生长液在细胞培养瓶中继续培养，培养温度为37℃，形成细胞单层时，用于继续传代或接种于生物反应器中进行微载体悬浮培养；（2）制苗用毒种的繁殖：将毒种用DMEM细胞培养基配制的细胞维持液稀释10倍，接种细胞单层，培养48～72小时，当细胞病变达75%以上时，收获感染细胞毒液，即为生产用毒种；（3）传代细胞在生物反应器中的微载体悬浮培养：取步骤（1）中已形成的细胞单层，经EDTA‑胰酶细胞分散液消化制备为细胞悬液，按5×105/mL～5×106/mL的细胞密度接种于生物反应器中，在生物反应器中加入微载体，设定培养条件为：温度37℃、pH6.8～7.6、溶氧30%～60%和搅拌速度30～60转/分钟；（4）制苗毒液的繁殖：当细胞达到5×106/mL～5×107/mL后进行接毒操作，所接入毒种为步骤（2）中生产的毒种，接毒前用含有10ug/mL胰酶的病毒培养液将长满细胞的微载体洗涤2～4次，设定培养条件为：温度37℃、pH6.8～7.6、溶氧30%～60%和搅拌速度30～60转/分钟；（5）伪狂犬病毒疫苗的收获：待微载体上细胞全部脱落，且溶解氧值呈明显上升趋势，将反应器内液体连同微载体一起收获，置与‑20℃条件下反复冻融2次，然后经离心或过滤去除微载体及细胞碎片，即制得伪狂犬病毒疫苗。