[发明专利]基于表位抗原肽的抗mtDNA抗体酶联免疫的检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201310531096.X | 申请日： | 2013-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN104597244A | 公开（公告）日： | 2015-05-06 |
| 发明（设计）人： | 吴庄民;陈晓翔;叶霜;张瑱 | 申请（专利权）人： | 吴庄民 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/564 |
| 代理公司： | 上海和跃知识产权代理事务所(普通合伙) 31239 | 代理人： | 杜林雪 |
| 地址： | 200042 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明基于线粒体DNA(mtDNA)的抗体酶联免疫检测方法，可用于系统性红斑狼疮的临床检测，通过系统性红斑狼疮患者外周血来源的mtDNA为抗原包板，建立抗mtDNA的抗体酶联免疫检测方法。该抗体特异性显著高于抗ds-DNA抗体，因此检测抗mtDNA抗体对系统性红斑狼疮的临床诊断和治疗的决策提供具有价值的信息。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 抗原 mtdna 抗体酶 免疫 检测 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种基于mtDNA为抗原的抗mtDNA抗体酶联免疫检测方法，包括如下步骤：1）应用线粒体分离试剂盒（Thermo）抽提哺乳动物培养细胞线粒体；2）应用DNA抽提试剂盒（Qiagen）提取线粒体DNA（mtDNA）；3）DNA凝胶电泳检测mtDNA完整性（约16,500bp），NanoDropTM1000分光光度仪检测mtD NA浓度（pg/ml）及质量（OD260/280>1.8）；4）用DNA包被液（Pierce）将mtDNA包被于ELISA板上（Nunc），包被浓度为5μg/ml，100μL每孔，4℃过夜；5）4℃取出包被板，PBS洗板4次，1%明胶室温封闭1h；6）清空封闭液，PBS洗板4次，加入1:100稀释的待测血清，室温孵育1‑2h；7）清空待测血清，PBS洗板4次，加入辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）二抗，室温孵育1h；8）清空抗人IgG二抗，PBS洗板5次，加入底物，室温避光孵育10‑15min；9）加入终止液，酶标仪波长450nm读取OD值。
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