[发明专利]重组蛋白质的纯化方法有效
| 申请号： | 201310545804.5 | 申请日： | 2013-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN104628846B | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 胡辉;朱云斌;臧美翎 | 申请（专利权）人： | 三生国健药业(上海)股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/18 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种重组蛋白的纯化方法,具体地，本发明涉及一种从包含重组蛋白和其相关蛋白的混合物中纯化该重组蛋白的方法，包括以下步骤：A、用处于第一电导率和pH的第一种平衡缓冲液使重组蛋白结合到离子交换介质上；B、用处于第二电导率和pH第二种平衡缓冲液继续平衡已结合蛋白的离子交换介质;C、用处于第三电导率和pH是逐步增加的洗涤液洗涤离子交换介质，洗脱下第一类相关蛋白;D、用处于第四电导率和pH的第一种洗脱液洗脱离子交换介质，洗脱下目的重组蛋白;E、用处于第五电导率和pH的第二种洗脱液继续洗脱离子交换介质，洗脱下第二类相关蛋白。该纯化方法不但提高了酸性和碱性相关蛋白去除率，而且降低了目标蛋白损失率。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 蛋白质 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从包含重组蛋白和其相关蛋白的混合物中纯化该重组蛋白的方法，其特征在于，该方法包括依次进行的下列步骤：/nA.用第一种平衡缓冲液使重组蛋白结合到离子交换介质上，其中第一种平衡液处于第一电导率和pH，/nB.用第二种平衡缓冲液继续平衡已结合蛋白的离子交换介质，其中第二种平衡液处于第二电导率和pH，/nC.用不同pH的洗涤液洗涤离子交换介质，从而从离子交换介质上洗脱下第一类相关蛋白，其中洗涤液处于第三电导率和pH是逐步增加的，/nD.用第一种洗脱液洗脱离子交换介质，从而从离子交换介质上洗脱下目的重组蛋白，其中第一种洗脱液处于第四电导率和pH，/nE.用第二种洗脱液继续洗脱离子交换介质，从而从离子交换介质上洗脱下第二类相关蛋白，其中第二种洗脱液处于第五电导率和pH，/n其中，所述第二种平衡缓冲液的电导率比第一种平衡缓冲液低，但pH两者相同，所述洗涤液的电导率比第一种平衡缓冲液低，但pH高于第一和/或第二种平衡缓冲液,所述第一种洗脱液的pH比洗涤液高，但电导率相同，所述第二种洗脱液的pH和/或电导率比第一种洗脱液高，所述的重组蛋白是抗体，所述第一类相关蛋白是重组蛋白的酸性突变体，为在CEX-HPLC上保留时间小于目标蛋白的那一类物质，所述第二类相关蛋白是重组蛋白的碱性突变体，为在CEX-HPLC上保留时间大于目标蛋白的那一类物质。/n
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