[发明专利]孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法

摘要

本发明公开了一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，包括以下步骤（1）富集有核细胞：①采全血；②离心，收集细胞沉淀物；③制备细胞悬液：在细胞沉淀物中加入细胞培养液，混匀制得稀释的细胞悬液；④离心管中预置细胞分离液，加入稀释的细胞悬液于分层液面上；⑤离心，得到细胞层；⑥吸取细胞层，加入Hank，s液，混匀、室温离心、洗涤细胞；⑦重悬细胞；（2）母血中胎儿有核细胞筛选；⑨分选出胎儿有核红细胞；⑩分选得到的胎儿有核红细胞图片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞，用于提取胎儿的全基因组DNA。本发明方法从孕妇外周血中分离纯化获得胎儿有核红细胞的纯度和回收率高。

主权项

一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）富集有核细胞①采全血；②离心，收集细胞沉淀物；③制备细胞悬液：在细胞沉淀物中加入等体积的36～38℃的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10%的胎牛血清，充分混匀制得稀释的细胞悬液；④离心管中预置细胞分离液，加入稀释的细胞悬液于分层液面上；细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 20～30份、质量分数为33.9％的泛影葡胺5～15份；⑤离心，得到细胞层；⑥吸取细胞层，转移到另一个离心管中，加入Hank，s液，混匀、室温离心、洗涤细胞；⑦在步骤⑥的离心管中加入等体积的平衡盐缓冲液，混匀，离心，用平衡盐缓冲液重悬细胞；（2）母血中胎儿有核细胞筛选⑧取步骤⑦重悬后得到的细胞悬液，加入鼠抗人的单克隆抗体试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟；⑨离心，弃上清液，用平衡盐缓冲液洗涤，离心，弃上清液，收集细胞，分选出胎儿有核红细胞；⑩分选得到的胎儿有核红细胞图片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞。