[发明专利]高效全血基因组DNA提取方法

摘要

本发明涉及一种快速、高效全血基因组DNA提取方法，属于核酸纯化领域。首先向全血中加入红细胞裂解液，涡旋，直至红细胞完全裂解，弃上清，吸干残留液体。加入白细胞裂解液和蛋白酶K，37oC水浴裂解白细胞，直至沉淀溶解。加入氯化钠和氯仿，离心分离DNA，并将上清液转移至另一洁净的EP管中。加入醋酸铵和冰乙醇沉淀DNA，75％乙醇洗涤后自然干燥，加入TE溶解得到DNA。本发明方法具有快速、高效和无毒的特点。所提取的DNA可用于聚合酶链反应（PCR）、甲基化检测、基因克隆等多种后续分子生物学研究。

主权项

一种高效全血基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）按全血：红细胞裂解液=1：1的体积比，向EP管中的全血中加入红细胞裂解液，涡旋2分钟后静置5分钟以上，直至溶液澄清透明，然后对溶液进行离心分离，转速为4000转/分钟，离心时间为2分钟，弃去上清液；（2）向步骤（1）的EP管中再加入占全血体积1/3的红细胞裂解液，涡旋1分钟，直至沉淀完全散开，然后对溶液进行离心分离，转速为4000转/分钟，分离时间为1分钟，弃去上清液；重复本步骤一次，并用吸水纸吸干残留液体；（3）向步骤（2）的EP管中加入占全血体积1/3的白细胞稀释液，另加入占全血体积1/600的蛋白酶K，混匀，37oC水浴60‑90分钟，直至沉淀完全溶解；（4）向步骤（3）的EP管中分别加入占全血体积1/12的5摩尔/升氯化钠溶液和占全血体积2/3的氯仿，充分摇匀，然后对溶液进行离心分离，离心转速为12000转/分钟，离心时间为5分钟，将上层液体转移至另一洁净的EP管中；（5）向步骤（4）的洁净的EP管中加入占管内溶液1／10体积的醋酸铵溶液和2倍体积的冰乙醇，充分摇匀，沉淀DNA，然后对溶液进行离心分离，离心分离的转速为4000转/分钟，分离时间为1分钟，弃去上清液；（6）向步骤（5）的洁净的EP管中加入占全血体积1/3的75%乙醇，对DNA沉淀洗涤，然后进行离心分离，转速为12000转／分，离心时间为1分钟，弃去上清液；重复本步骤两次；（7）将步骤（6）的洁净的EP管倒立放置在放有吸水纸的水平实验台上，自然干燥5分钟；（8）向步骤（7）的洁净的EP管中加入与全血同等体积的TE缓冲液，溶解DNA沉淀。