[发明专利]检测沉默GPC-3基因转录抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法在审
| 申请号： | 201310601573.5 | 申请日： | 2013-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN103743902A | 公开（公告）日： | 2014-04-23 |
| 发明（设计）人： | 姚登福;陈洁;姚敏;王理 | 申请（专利权）人： | 南通大学附属医院 |
| 主分类号： | G01N33/574 | 分类号： | G01N33/574;G01N33/535;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 高之波;邬玥 |
| 地址： | 226001*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测沉默GPC-3基因转录抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法。通过1）针对靶基因共有序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,再合成相应dsDNA，将dsDNA插入载体构建4种重组质粒，并通过荧光定量PCR挑选出干扰效率最高的一种重组质粒；2）将上述干扰效率最高的重组质粒转染至HepG2细胞中构建转染HepG2细胞，并对其进行筛选，得到稳定转染HepG2细胞;3）将上述稳定转染HepG2细胞接种裸鼠皮下构建人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型；4）而后测定上述稳定转染HepG2细胞在人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型中生长情况。通过以上方法来检测沉默GPC-3基因转录抑制肝癌裸鼠移植瘤能力，可以用于GPC-3对移植瘤的研究。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 沉默 gpc 基因 转录 抑制 肝癌 移植 能力 方法 | ||
【主权项】：
检测沉默GPC‑3基因转录抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法，该方法包括如下步骤： 1）针对靶基因human GPC3,Gene ID:2719的4个转录本的共有序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,再合成相应dsDNA，将dsDNA插入载体构建4种GPC‑3‑miRNA重组质粒，并通过荧光定量PCR挑选出干扰效率最高的一种GPC‑3‑miRNA重组质粒； 2）将上述干扰效率最高的重组质粒转染至HepG2细胞中构建转染HepG2细胞，并对其进行筛选，得到稳定转染HepG2细胞; 3）将上述稳定转染HepG2细胞接种裸鼠皮下构建人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型； 4）而后测定上述稳定转染HepG2细胞在人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型中生长情况。
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