[发明专利]一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法

摘要

本发明公开了一种从乳猪皮中提取未变性天然胶原的方法，其特点是：用脱脂剂辅以间歇性超声波分步多次不同组合进行处理，用脱毛剂和非胶原蛋白去除剂分别进行脱毛和非胶原蛋白的去除，脱毛后皮中已无毛根，测定脂肪含量低于0.5%，灰分含量低于0.3%；以乙酸-蛋白酶浸提得到酶溶胶原，利用高速离心、氯化钠盐析和透析纯化胶原，冻干后得到海绵状乳猪皮胶原，胶原的提取率超过50%（干重），电泳图表明乳猪皮胶原含有β链和α链，分子量分别为20万和10万，无其他杂蛋白条带，表明胶原保留了三股螺旋结构，且具有较高的纯度。

主权项

一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）原料预处理将新鲜乳猪皮100份，去除皮下脂肪，用料液比为1∶5‑20（w/v），体积浓度为30%‑60%单一脱脂剂处理24‑48h，伴随间歇性功率为50‑200W超声波每作用10‑30min停5‑20min，重复5‑10次，中途换液3‑5次，自来水冲洗，加入料液比为1∶1.5‑4（w/v），体积浓度为0.5%‑3%脱毛剂，保持温度为25‑45，℃转动30‑60min进行脱毛，然后将皮切碎，加入料液比为1∶10‑40（w/v），浓度为0.05‑0.5M/L非胶原蛋白去除剂，搅拌处理24‑48h，中途换液3‑5次，自来水冲洗，调节pH至7.5‑9.0，再用料液比为1∶6‑15（w/v），体积浓度为20‑50%复合脱脂剂处理24‑48h，伴随间歇性功率为50‑200W超声波每作用10‑30min停5‑20min，重复5‑10次，中途换液3‑5次，蒸馏水浸洗，测定脂肪含量为0.3%～0.5%，产物作为胶原提取原料；（2）未变性天然胶原的提取将上述预处理所得的乳猪皮加入浓度为0.1‑2M/L乙酸溶液和浓度为1wt%‑5wt%提取剂，搅拌提取2‑3天，获得未变性乳猪皮胶原溶液；（3）未变性天然胶原的纯化将上述未变性乳猪皮胶原溶液用8000‑20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上清液中加入0.5‑3M/L的NaCl盐析，沉淀经离心后用0.05‑1M/L的乙酸溶解，如此反复盐析操作2‑4次，再以浓度为0.1‑1M/L的乙酸溶液为透析液透析处理2‑3天，冻干，得到海绵状乳猪皮胶原；（4）以上步骤中除特殊说明外，均在温度15℃以下进行。