[发明专利]G418抗性标记在农杆菌介导的木霉遗传转化中的应用无效
申请号: | 201310611921.7 | 申请日: | 2013-11-26 |
公开(公告)号: | CN103820487A | 公开(公告)日: | 2014-05-28 |
发明(设计)人: | 唐俊;陈捷;马越;张雷 | 申请(专利权)人: | 阜阳师范学院 |
主分类号: | C12N15/80 | 分类号: | C12N15/80;C12N1/15;C12R1/885 |
代理公司: | 上海胜康律师事务所 31263 | 代理人: | 张坚 |
地址: | 236037 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | 本发明涉及G418抗性标记的农杆菌介导的木霉遗传转化中的应用,以G418的抗性为木霉抗性筛选标记。该农杆菌介导的木霉遗传转化方法包括将G418抗性基因与经过酶切并去磷酸化的载体p1300连接成p1300-neo载体;农杆菌菌株活化并培养至OD600值为0.3~0.6,并用15~25mmol/L CaCl2重悬菌体,制备农杆菌感受态细胞;将p1300-neo载体与农杆菌感受态细胞混匀,35~40℃保温至少3min,用LB培养基在25~35℃培养,再用含卡那霉素和利福平的YEB培养基培养并筛选出重组农杆菌;将处于对数生长期且OD660值为0.6~0.8的活化的重组农杆菌菌液与木霉分生孢子悬液混匀并诱导培养,再用含G418的M-100培养基在25~30℃培养并筛选出抗G418的木霉。本发明为木霉菌增加了一种新的抗性选择标记,为研究木霉的基因功能带来了巨大方便,而且价格便宜。 | ||
搜索关键词: | g418 抗性 标记 杆菌 遗传 转化 中的 应用 | ||
【主权项】:
一种G418在农杆菌介导的木霉遗传转化中的应用,其特征是:以G418的抗性为木霉抗性筛选标记。
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