[发明专利]对氧磷酶1基因的表达纯化方法在审
| 申请号： | 201310701927.3 | 申请日： | 2013-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN104726497A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 张耀洲;谭淑敏;李杰;王小飞;盖其静 | 申请（专利权）人： | 天津耀宇生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/55;C12N9/16 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人： | 孙艳敏 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区经济技术开发区*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种对氧磷酶1基因的表达纯化方法，属于基因工程技术领域。本发明的方法是首先扩增对氧磷酶1基因，连接到转移载体pFastBacTMⅠ上构建重组转移载体，转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得含有对氧磷酶1基因的重组杆状病毒DNA，将其转染家蚕BmN细胞，复制装配成含对氧磷酶1基因的重组病毒后，接种家蚕五龄幼虫，发病后取蚕血，经离心过滤除杂并经浓缩后用汽巴蓝亲和层析以及抗体亲和层析纯化蚕血，获得对氧磷酶1蛋白。该方法实现了蛋白的高效表达且结构接近天然蛋白，解决了天然PON1含量低、难纯化的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 氧磷酶 基因 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种对氧磷酶1基因的表达纯化方法，其特征在于，步骤如下：（1）扩增对氧磷酶1基因，连接到转移载体pFastBacTM1上构建重组转移载体，重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得含有对氧磷酶1基因的重组杆状病毒DNA，将重组杆状病毒DNA转染家蚕BmN细胞使其在细胞内复制装配成含对氧磷酶1基因的重组病毒；（2）步骤（1）的重组病毒接种家蚕五龄幼虫，发病后取蚕血，经离心过滤除杂并经浓缩后用汽巴蓝亲和层析以及抗体亲和层析纯化蚕血，获得对氧磷酶1蛋白。
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