[发明专利]海水养殖中5种弧菌的NASBA-微孔板检测试剂盒及检测方法

摘要

海水养殖中5种弧菌的NASBA-微孔板检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包括酶混合液和含正义引物和反义引物的反应液，还包括5种探针溶液，5种探针溶液分别为副溶血弧菌探针溶液，溶藻弧菌探针溶液，哈维氏弧菌探针溶液，创伤弧菌探针溶液，鳗弧菌探针溶液，检测方法为裂解液抽提总RNA，用反应液扩增总RNA得到NASBA扩增产物，同时在微孔板进行各探针包被，NASBA扩增产物与探针杂交显色反应，然后检测A405nm的吸收值，该检测试剂盒灵敏、特异，检测时操作方便，可现场快速检测出海水养殖中5种弧菌。

主权项

海水养殖中5种弧菌的NASBA‑微孔板检测试剂盒，该NASBA‑微孔板试剂盒包括酶混合液和含正义引物、反义引物的反应液，其特征在于还包括5种探针溶液，所述正义引物为引物gyrB‑R，所述反义引物为引物gyrB‑F1和引物gyrB‑F2，所述5种探针溶液分别为含有生物素标记的探针Vpa‑probe的副溶血弧菌探针溶液，含有生物素标记的探针Val‑probe的溶藻弧菌探针溶液，含有生物素标记的探针Vha‑probe的哈维氏弧菌探针溶液，含有生物素标记的探针Vvu‑probe的创伤弧菌探针溶液，含有生物素标记的探针Van‑probe的鳗弧菌探针溶液，各引物和探针的核苷酸序列分别如下：引物gyrB‑R：AATTCTAATA CGACTCACTA TAGGGAGA GTCATGATGA TGATGTTGTG；引物gyrB‑F1：GACTGTCAGG AAAAAGATCC；引物gyrB‑F2：CGTGAAGCGG CGCGTAAAGC；探针Vpa‑probe：CAGCTAAGCA GGGTCGTAAT；探针Val‑probe：GTACAACCCG GACAAGCTTC；探针Vha‑probe：GCTATCTTCT CAAGAAGTAG C；探针Vvu‑probe：CTGATCACTG CACTAGGTTG；探针Van‑probe：AAAACCAAGC GATTTTGCCA。