[发明专利]一种含有藻类的水中“两虫”的富集、纯化方法及其含量测定方法在审
申请号: | 201310713298.6 | 申请日: | 2013-12-20 |
公开(公告)号: | CN104726337A | 公开(公告)日: | 2015-06-24 |
发明(设计)人: | 李红岩;于建伟;魏魏;安伟;杨敏 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生态环境研究中心 |
主分类号: | C12N1/10 | 分类号: | C12N1/10;C12Q1/06;C12R1/90 |
代理公司: | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人: | 叶凡 |
地址: | 100085*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了一种含有藻类的水中“两虫”的富集、纯化方法及其含量的测定方法。本发明的富集、纯化方法包括首先对含藻水进行加压处理,沉淀去除藻类,再对上清液进行混合醋酸纤维滤膜过滤,丙酮溶解富集产物,离心后获得含有“两虫”的富集沉淀物,接着向沉淀中加入磷酸盐-吐温缓冲溶液制成“两虫”悬浮液,然后进行密度梯度离心处理得到“两虫”纯化液,最后将“两虫”通过过滤附着在醋酸纤维膜上,染色处理后进行荧光显微镜检测,计数。本发明方法对含藻水样中“两虫”的浓缩和分离纯化方法进行改进,减小了镜检时背景杂质的干扰,检测方法的回收率高,检测结果准确,符合美国国家环保局制定的用于测定水中“两虫”的质量控制标准。 | ||
搜索关键词: | 一种 含有 藻类 水中 富集 纯化 方法 及其 含量 测定 | ||
【主权项】:
一种含有藻类的水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的富集、纯化方法,包括如下顺序进行的步骤:1)加压处理对含有藻类的水进行加压处理,然后静置放置,获得上清液;2)浓缩、富集处理首先,采用醋酸纤维滤膜对上清液进行过滤;接着将过滤后醋酸纤维滤膜和滤膜截留物加入到丙酮中,溶解、分散,获得丙酮溶解‑分散混合物;然后对丙酮溶解‑分散混合物进行离心处理,收集沉淀,获得“两虫”富集沉淀;3)分离、纯化处理向“两虫”富集沉淀中加入磷酸盐‑吐温缓冲溶液,混匀,制成“两虫”悬浮液,接着向悬浮液中加入Percoll‑蔗糖介质,进行密度梯度离心处理,离心混合液分为3层,取中间层,即得纯化的隐孢子虫和贾第鞭毛虫。
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