[发明专利]一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总RNA的方法

摘要

本发明属于环境分子生物学技术领域，涉及一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总RNA的方法，取活性污泥离心，弃上清，然后向离心管内加入灭菌玻璃珠和贮存液Ⅰ，将离心管管盖拧紧后置于旋涡混合器击打，离心弃上清，磷酸盐缓冲液洗涤；加入贮存液Ⅱ温育；加入TRIzol，漩涡振荡后离心取上清，加入氯仿，漩涡振荡，室温放置并离心取上清，加入异丙醇，－20℃放置后离心弃上清，加入75％乙醇洗涤沉淀，离心弃上清，风干沉淀，贮存液Ⅲ溶解核酸沉淀，加入DNase I(RNase free)和RNase抑制剂，采用RNA纯化试剂盒纯化RNA。简化了微生物总RNA提取步骤，实现了快速、高效的提取厌氧颗粒污泥的微生物总RNA。

主权项

一种提取厌氧颗粒污泥微生物总RNA的方法，包括下列步骤：1）取活性污泥于灭菌离心管中离心；2）弃上清，然后向离心管内加入灭菌玻璃珠和贮存液Ⅰ，将离心管管盖拧紧后置于旋涡混合器击打3～8min以解絮凝并洗涤污泥除去腐殖酸，离心；3）弃上清，重复步骤2）处理1次后，用磷酸盐缓冲液PBS洗涤污泥1次；4）取步骤3）预处理后的污泥，加入贮存液Ⅱ于30～40℃温育5～15min；5）加入TRIzol，漩涡振荡3～8min后，离心；6）取上清，加入氯仿，漩涡振荡10～20s后，室温放置1～4min并离心；7）取上清，加入异丙醇，－20℃放置15～25min，离心；8）弃上清，加入75％乙醇洗涤沉淀后，9000～11000r/min离心3～8min；9）弃上清，风干沉淀，用贮存液Ⅲ溶解核酸沉淀后，加入DNase I(RNase free)25～35U和RNase抑制剂35～40U，并于30～40℃作用10～20min，进一步采用RNA纯化试剂盒纯化RNA。