[发明专利]一种使用固相和液相组合技术制备利西拉来的方法

摘要

本发明涉及一种使用固相和液相组合技术制备利西拉来的方法，所述方法包括利用固相化学分别合成1-17，18-29和30-44三个肽中间体片段，然后利用液相化学缩合得到利西拉来。通过本发明路线制备利西拉来，操作步骤简短，后处理简单，副产物少，产率高，污染小，适合大规模的工业化生产。

主权项

1.一种利用固相和液相组合技术制备利西拉来的方法，利西拉来的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示， 所述方法包括以下步骤： (1)以氨基树脂为载体，按照Fmoc固相合成方法，将具有侧链保护基团的氨基酸从肽链碳端到氮端依次偶联，获得侧链保护的肽中间体片段a(AA₃₀-AA₄₄)的氨基树脂； (2)以三苯甲基树脂为载体，按照Fmoc固相合成方法，将具有侧链保护基团的氨基酸从肽链碳端到氮端依次偶联，获得侧链保护的肽中间体片段b(AA₁₈-AA₂₉)的三苯甲基树脂； (3)以三苯甲基树脂为载体，按照Fmoc固相合成方法，将具有侧链保护基团的氨基酸从肽链碳端到氮端依次偶联，获得侧链保护的肽中间体片段c(AA₁-AA₁₇)的三苯甲基树脂； (4)将侧链保护的肽中间体片段a、b、c从树脂上切割下来，在溶液中进行缩合反应，得到侧链保护肽(c-b-a)； (5)脱除侧链保护肽(c-b-a)的侧链保护基和N端组氨酸上的α-氨基的Boc保护基，得到利西拉来粗肽； (6)纯化后得到利西拉来； 所述具有保护基团的氨基酸中，N端第1位组氨酸的α-氨基的保护基为Boc，其余氨基酸的α-氨基的保护基为Fmoc，赖氨酸与色氨酸的侧链保护基团为Boc，组氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺的侧链保护基团为Trt，天冬氨酸与谷氨酸的侧链保护基团为OtBu，苏氨酸与丝氨酸的侧链保护基团为tBu，精氨酸的侧链保护基团为Pbf。