[发明专利]道地丹参的培育方法

摘要

本发明涉及一种道地丹参的培育方法。步骤是经过建立丹参种质资源圃、从中评选出代表性的道地丹参种质资源、鉴定道地丹参基因组核型结构、确定道地丹参DNA条形码、进行人工诱变成同源四倍体、进行有性杂交获得三倍体丹参永久杂种、脱毒处理、组培苗克隆增殖、瓶苗移栽、移栽苗的管理、新品种评比试验、药材产量和主要药物有效成分测定、道地丹参新品种认定和品种鉴定。本发明是迄今为止唯一具有自然界二大优势，即：多倍体优势和杂种优势的种群，其优势表现出巨大性和不可替代性。因此，本发明是利用中药道地功能基因组及其特征基因，依据道地中药本身固有的基因，培育对生物及非生物胁迫能力强的道地中药的有效方法。

主权项

一种道地丹参的培育方法，其特征在于包括以下步骤：1）收集全国野生丹参种质资源建立丹参种质资源圃，建立具有中国代表性的丹参种质资源圃；2）从形态学、细胞生物学（染色体水平）、分子生物学水平对中国丹参种质资源进行研究，评选出具有代表性的道地丹参种质资源；3）对评选出的道地丹参种质资源的基因组染色体结构进行鉴定；4）利用AFLP分子标记技术确定道地丹参DNA条形码；5）将一个具有隐性标记性状的二倍体道地丹参和一个具有显性标记性状的二倍体（2x）道地丹参，分别进行人工诱变成同源四倍体：4x，含有4个相同的道地丹参功能基因组；6）三倍体丹参杂交转育，分别将具有隐性标记性状（白花）和具有显性标记性状（紫花）的四倍体丹参，分别与具有相对性标记性状的二倍体道地丹参，2x，含有2个相同道地丹参功能基因组，进行杂交转育：4x♀×2x♂或2x♀×4x♂，获得具有标记性状的三倍体丹参永久杂种：3x，含有3个相同道地丹参功能基因组；7）脱毒处理：取三倍体丹参杂交当代种子幼苗茎尖或新生幼叶为外植体，用75％酒精和0.1％升汞进行脱毒处理；8）组培苗克隆快繁：将脱毒处理完的材料接种在1/2MS＋6BA1.5mg/L培养基上，在光周期14小时/天，光强度3000Lux，室温20—25℃条件下进行培养，待材料切割面产生丛生芽，转入含1/2MS＋6BA1mg/L培养基上进行扩大繁殖；9）瓶苗移栽，待瓶苗新根长2—3公分时，进行瓶苗移栽，移栽前2天打开瓶盖练苗；10）移栽苗管理，刚移出的瓶苗要半遮光，保持50％左右的湿度，加强管理成活率可达90％以上；11）新品种评比试验，按常规新品种评比试验要求进行；12）药材产量、药物主要有效成分含量测定，根据《中华人民共和国药典》规定，对丹参酮ⅡA、丹酚酸B和隐丹参酮进行测定；13）道地丹参新品种认定：按上述程序，依据得到的丹参药材产量和主要药物有效成分含量，可培育出综合生物学性状好，抗生物及非生物胁迫能力强，全面提高50％以上的道地丹参新品种。