[发明专利]含N-非取代葡萄糖胺肝素六糖的制备及其纯化

摘要

本发明涉及一种含N-非取代葡萄糖胺(GlcNH₃⁺)肝素六糖的制备及其纯化。所述方法是以酶解低分子量肝素为原料，通过凝胶色谱和离子交换高效液相色谱等方法分离提纯肝素钠六糖；利用阳离子交换树脂和吡啶中和法制备肝素吡啶六糖；最后用脱N-硫酸化法制备含不同GlcNH₃⁺数目的肝素六糖，并用SAX-HPLC等方法进行分离提纯。本方法可特异性制备出含不同GlcNH₃⁺数目和序列的系列肝素寡糖，为硫酸类肝素中GlcNH₃⁺残基的结构与功能及其与疾病关系的研究提供重要的糖库。

主权项

一种含N‑非取代葡萄糖胺肝素六糖的制备及其纯化方法，其步骤为：酶解低分子量肝素利用凝胶色谱进行分离；分离后经除流动相、冷冻干燥后得到不同聚合度的肝素钠寡糖混合物；用SAX‑HPLC分离收集得到高度硫酸化的肝素钠六糖；把收集到的肝素钠六糖经脱盐与冷冻干燥之后，通过阳离子交换，再用吡啶中和洗脱液的pH至弱酸性，得到肝素吡啶六糖；将肝素吡啶六糖用DMSO：H₂O（v/v）=95：5溶剂溶解，选择性地脱除N位上的硫酸根，再用SAX‑HPLC方法分离收集得到含不同GlcNH₃⁺数目的肝素六糖 ，经除盐与冷冻干燥之后得到纯化的含不同GlcNH₃⁺数目的肝素六糖。