[发明专利]一种用于丙型肝炎病毒核酸检测和基因分型的多重荧光PCR检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种用于丙型肝炎病毒核酸检测和基因分型的多重荧光PCR检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括RT-PCR反应液、酶混合液、HCV反应液Ⅰ、HCV反应液Ⅱ、HCV反应液Ⅲ，优选的，还包括HCV分型阴性对照、HCV分型阳性对照及使用说明书。本发明对提取的HCV RNA，采用三管多重荧光PCR，通过一步法RT-PCR，快速检测样本中丙型肝炎病毒RNA及其亚型。本发明的试剂盒扩增方法简单、操作简便，检测结果灵敏度高、特异性好，可用于人血清或血浆中HCV RNA的检测和基因分型，有助于判断治疗的难易程度、制定个体化抗病毒治疗方案，具有临床推广应用价值。

主权项

一种用于丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）核酸检测和基因分型的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下成分：RT‑PCR反应液、酶混合液、HCV反应液Ⅰ、HCV反应液Ⅱ以及HCV反应液Ⅲ；其中，HCV反应液Ⅰ用于检测HCV通用型和1b亚型，其包括以下引物序列和探针：用于HCV通用型检测的引物序列是：HCV‑F：5’‑AGCCATAGTGGTCTGCGGAA‑3’；HCV‑R：5’‑CRACCCAACRCTACTCGGCT‑3’；对应的探针序列是：HCV‑P：5’‑AGTACACCGGAATYGCCRGGAHGAC‑3’；及用于HCV1b亚型检测的引物序列是：HCV1b‑F：5’‑GCCCAGGAGCAACTTGAAAA‑3’；HCV1b‑R：5’‑GAGAGTAACTATGGAGTGAA‑3’；对应的探针序列是：HCV1b‑P：5’‑CTCCATTGAGCCACTTGACCTACCT‑3’；其中，HCV反应液Ⅱ用于检测HCV2a和6a亚型，其包括以下引物序列和探针：用于HCV2a亚型检测的引物序列是：HCV2a‑F：5’‑CGGAGGCTATGACCAGGTATTC‑3’；HCV2a‑R：5’‑GGCATCACGGGTGAGGTAATAG‑3’；对应的探针序列是：HCV2a‑P：5’‑ACCTCCTCCCCTTGTCGTCCCGT‑3’；及用于HCV6a亚型检测的引物序列是：HCV6a‑F：5’‑CTTGCCTCAGGAAACTTGGG‑3’；HCV6a‑R：5’‑TAGCTTGGTCTTCACTGCCC‑3’；对应的探针序列是：HCV6a‑P：5’‑TGCGAGCCTGGAGACATCGAGCCA‑3’；其中，HCV反应液Ⅲ用于检测HCV3a和3b亚型，其包括以下引物序列和探针：用于HCV3a亚型检测的引物序列是：HCV3a‑F：5’‑CCTTGACTTTGAAATGTACG‑3’；HCV3a‑R：5’‑GCTCTACTGGAGAGTAACTG‑3’；对应的探针序列是：HCV3a‑P：5’‑ACTCTGTCACTCCGCTGGATTTACC‑3’；及用于HCV3b亚型检测的引物序列是：HCV3b‑F：5’‑GCACCAAAACCAAACTCACT‑3’；HCV3b‑R：5’‑GAGTAGGCAAAGCAGCAAAT‑3’；对应的探针序列是：HCV3b‑P：5’‑CTGCGGGCCAGCTAGATCTTTC‑3’。