[发明专利]基于微流控微珠阵列芯片和DNA聚合酶介导引物延伸技术的微小核糖核酸检测方法无效
| 申请号： | 201410032429.9 | 申请日： | 2014-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN103834726A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 张何;傅昕;刘媛;朱振军 | 申请（专利权）人： | 湖南工程学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 411104 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于微流控微珠阵列芯片和DNA聚合酶介导引物延伸技术的微小核糖核酸检测方法。本发明是将生物素修饰的微小核糖核酸捕获探针通过生物素-亲合素结合方法固定于亲合素修饰微球的表面形成功能化微球，该微球固定在微流控芯片检测区的相应微型小室中，形成微流控微珠阵列检测芯片；然后将含有微小核糖核酸的样品溶液流入微流控微珠阵列检测芯片，再流入DNA聚合酶溶液及生物素化延伸底物，最后流入亲合素标记的量子点，然后计算流入微小核糖核酸后微球表面荧光进行定性和定量。本发明高灵敏、高特异的检测微小核糖核酸，实现了总RNA样品中微小核糖核酸的特异及灵敏的定量分析。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 微流控微珠 阵列 芯片 dna 聚合 导引 延伸 技术 微小 核糖核酸 检测 方法 | ||
【主权项】：
基于微流控微珠阵列芯片和DNA聚合酶介导引物延伸技术的微小核糖核酸检测方法，其特征是，其步骤如下：(1)生物素修饰的微小核糖核酸捕获探针通过生物素‑亲合素结合方法固定于亲合素修饰微球的表面形成功能化微球，该微球固定在微流控芯片检测区的相应微型小室中，形成微流控微珠阵列检测芯片；(2)将含有微小核糖核酸的样品溶液流入步骤(1)中形成的微流控微珠阵列检测芯片，微小核糖核酸与微球表面的捕获探针杂交形成DNA／RNA二聚体；(3)流入DNA聚合酶溶液及生物素化延伸底物，以微小核糖核酸为引物，捕获探针为模版，通过DNA聚合酶介导的延伸反应，将生物素化延伸底物增加在微小核糖核酸的3’末端；其中介导反应时间为15～20min；(4)流入亲合素标记的量子点，该量子点能与微小核糖核酸上结合的生物素识别并固定；(5)通过计算流入微小核糖核酸后微球表面荧光进行定性和定量。
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