[发明专利]一种新型替代内源基因表达的慢病毒载体及其构建方法在审
| 申请号： | 201410034811.3 | 申请日： | 2014-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN104805119A | 公开（公告）日： | 2015-07-29 |
| 发明（设计）人： | 陈齐;刘军;谢丹 | 申请（专利权）人： | 杭州纽贝生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市杭州经济技术开发区6*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种新型替代内源基因表达的慢病毒载体，在慢病毒5’和3'LTR中间插入U6启动子用于转录一段shRNA序列，shRNA插入区含有BamHI和XhoI双酶切位点，可插入退火后的shRNA序列；EFla启动子转录表达Flag标签融合的外源基因，Flag标签融合在外源基因的N端，多克隆位点含有HpaI、EcoRI和NheI3种酶切位点用于插入外源基因，其中HpaI为平末端酶切，保证任何基因都可以插入；IRES用于启动表达EGFP报告基因；实现一条由EFla转录的RNA可以产生两个蛋白，即过表达外源蛋白和EGFP。本发明克服了以往载体的缺点，提供了一种快速、高效的细胞内基因改造的手段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 新型 替代 内源 基因 表达 病毒 载体 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种新型替代内源基因表达的慢病毒载体，其特征是：这种慢病毒载体具有以下结构：在慢病毒5’和3’LTR中间插入U6启动子用于转录一段shRNA序列，shRNA插入区含有BamHI和XhoI双酶切位点，可插入退火后的shRNA序列；EF1a启动子转录表达Flag标签融合的外源基因，Flag标签融合在外源基因的N端，多克隆位点含有HpaI、EcoRI和NheI3种酶切位点用于插入外源基因，其中HpaI为平末端酶切，保证任何基因都可以插入；IRES用于启动表达EGFP报告基因；实现一条由EF1a转录的RNA可以产生两个蛋白，即过表达外源蛋白和EGFP。
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