[发明专利]寡肽CD01及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一个小分子寡肽及其制备方法，具体是寡肽CD01及其制备方法和应用,本发明公开了寡肽的氨基酸序列如SEQ ID:1所示，可以采用合成，提取或者基因工程等方式制备寡肽CD01，在制备治疗抗炎镇痛、创面修复以及提高免疫的药物中有较好的治疗效果。

主权项

1.一种寡肽CD01，其特征在于，由Y、E、H 3个氨基酸残基组成，分子量为447.45 Da，其氨基酸序列如SEQ ID:1 所示，所述寡肽的制备方法，包括如下步骤：a.合成顺序为从C端到N端;取1倍摩尔当量的树脂放入多肽合成仪反应器中，加入DCM(二氯甲烷)溶胀半小时，然后抽掉DCM，加入序列中第一个Fmoc保护的氨基酸10mmol，2倍摩尔当量的DIEA(二异丙基乙胺)，加入DMF(二甲基甲酰胺)和DCM溶液,以可使树脂充分鼓动起来为宜，用氮气鼓泡反应60min；然后加入5倍摩尔当量甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用DMF、甲醇洗净;b.加入适量哌啶去除Fmoc（9‑芴甲氧羰基）保护基，洗净，茚三酮检测；c.往反应器中加入2倍摩尔当量序列中的第二个氨基酸，2倍摩尔当量HBTU（苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸盐）及DIEA，氮气鼓泡反应半小时，抽掉液体，用DMF,甲醇洗净，茚三酮检测;d.重复依步骤b、c的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮检测;e.将树脂用氮气吹干后，从反应柱中取下并称取重量，倒入烧瓶中，然后往烧瓶中加一定量的95%TFA（三氟乙酸）切割液，震荡反应2 h，目的是将多肽从树脂载体上裂解下来并去除氨基酸的侧链保护基团；f.滤掉树脂，得到滤液，然后向滤液中加入大量乙醚，析出粗产物，然后离心，清洗即可得到该序列的粗产物；g.分析提纯和质谱检测：用ESI（电喷雾电离）离子源质谱仪检测该序列分子量的正确性，用高效液相色谱将粗品提纯至要求纯度；h.收集纯化好的目标寡肽溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末。