[发明专利]一种TALE聚体库的构建方法无效
| 申请号： | 201410045243.7 | 申请日： | 2014-02-07 |
| 公开（公告）号： | CN103789840A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 王文忠;施金秀;张玮;蒙伟能;李春园;温华杰 | 申请（专利权）人： | 赛业（广州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/02;C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510663 广东省广州市科*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种TALE聚体库的构建方法，该方法通过TALE单体扩增、构建酶切连接产物、酶切连接产物扩增、BP反应后建立TALE聚体库。利用TALE聚体库，可以组装识别20-25bpTales模块，扩大识别区域。本发明的方法准确率高，灵活性和高通量，可以准确地高通量构建载体，大大节约成本。该方法可以扩大识别区域，准确地高通量构建载体，大大节约成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 tale 聚体库 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种TALE聚体库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）TALE单体扩增：分别以pTALE‑NI，pTALE‑NG，pTALE‑NH，pTALE‑HD载体为模板，使用引物对TALE‑Fn/TALE‑Rn进行扩增，分别得到第一类至第十五类单体的混合物和第十六类单体N16，其中，所述n为1至16；（2）构建酶切连接产物：分别将所述第一类至第十五类单体进行酶切和连接，得到第一至第八酶切连接产物；（3）酶切连接产物扩增：分别以所述第一至第八酶切连接产物和第十六类单体N16为模板，使用引物对attB1‑F/attB1‑R进行扩增，分别得到第一类至第六类五聚体混合物、三聚体混合物、二聚体混合物和第十六类单体N16扩增产物；（4）TALE聚体克隆：分别将所述第一类、第二类、第三类、第四类、第五类、第六类五聚体混合物、三聚体、二聚体混合物以及第十六类单体N16扩增产物，与pDonr221载体（Kana+）进行BP反应，将BP反应产物进行转化并进行测序；（5）TALE聚体库构建：根据确定的五聚体、三聚体、二聚体和单体序列信息，得到第一类至第五类五聚体库、三聚体库、二聚体库和单体库。
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