[发明专利]一种实时FRET-PCR和巢式PCR检测和分型立克次氏体的引物、探针及试剂盒

摘要

本发明涉及一种实时FRET-PCR和巢式PCR检测和分型立克次氏体的引物、探针及试剂盒。所述引物、探针如序列1-8所示。本发明设计FRET-PCR的引物和探针，可以特异地扩增所有立克次氏体种属的核酸，从而快速的判断出阳性样品；然后选择相同基因的其他保守区间设计巢式PCR的2对引物，并通过巢式PCR、琼脂糖凝胶电泳和测序确定相应阳性样品的立克次氏体种属。因此，此系统不仅能快速、特异的检测到所有种属的立克次氏体，而且能确定其种属。

主权项

用于实时FRET‑PCR和巢式PCR检测和分型立克次氏体的引物及探针，其特征在于，由FRET‑PCR引物、探针，以及巢式PCR引物组成，所述引物、探针的具体序列如下：（1）FRET‑PCR引物、探针：FRET‑上游引物：5’‑TTRCAAATAGCAATAGAACTTGAAGCT‑3’FRET‑下游引物：5’‑ATCCAGCCTACGGTTCTTGCT‑3’6‑FAM探针:5’‑ATCGCTCTTAAAGATGAATATTTTATTGAG‑6‑FAM‑3’LCRed640探针:5’‑LCRed‑640‑GAAAATTATATCCAAATGTTGATTTTTATTC‑磷酸‑3’；（2）巢式PCR：N‑上游引物‑1：5’‑AGTAAATCCAATAATAAAAAATGCKCTTAATA‑3’N‑下游引物‑1：5’‑ATTTTCTCTCAATAAAATATTCATCTTTAAG‑3’N‑上游引物‑2：5’‑ATGAGCAGAATGCTTCTACTTCAACA‑3’N‑下游引物‑2：5’‑AGCTTCAAGTTCTATTGCTATTTGYAA‑3’。