[发明专利]检测血液中弓形虫感染的双重荧光定量PCR方法及其特异引物无效
| 申请号： | 201410087454.7 | 申请日： | 2014-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN103952471A | 公开（公告）日： | 2014-07-30 |
| 发明（设计）人： | 黄翠琴;王寿昆;赵东岳;郑新添 | 申请（专利权）人： | 龙岩学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/90 |
| 代理公司： | 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 | 代理人： | 戴雨君 |
| 地址： | 364000 福建省龙岩市新罗*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了检测血液中弓形虫的双重荧光定量PCR检测方法及其特异引物，通过加入两种特异性引物，六步反应检测弓形虫，具体是：1）提取弓形虫RH株基因组模板；2）利用两种特异引物对分别进行Touch-downPCR扩增；3）制备重组质粒PUM-T-ITS-1和PUM-T-529bp；4）标准曲线的建立；5）标准曲线的绘制；6）溶解曲线的绘制。本发明借助反应程序溶解曲线Tm值的特异性和稳定性，选择弓形虫基因组高度保守的ITS-1序列和529bp重复序列两段序列为靶基因，建立检测弓形虫的双重SYBRGreenⅠreal-timePCR方法，该双重染料法荧光定量PCR与探针法相比，既可减少高昂的成本，又可减少因染料法导致非特异性扩增和检测体系不稳定等因素造成的漏检现象。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 血液 弓形虫 感染 双重 荧光 定量 pcr 方法 及其 特异 引物 | ||
【主权项】：
两种检测弓形虫感染的特异引物对，其特征在于：利用 ITS‑1序列设计第一种特异引物对，所述第一种特异引物对为：上游：5′‑ACAGCGAAGGGGCTCAAT‑3′；下游：5′‑AGCAATCTGAAAGCACATCG‑3′；利用529bp序列设计第二种特异引物对，所述第二种特异引物对为：上游：5′‑AGCCACAGAAGGGACAGAAGT‑3′；下游：5′‑GTCTCTTTTTCCACCCTCCAG‑3′。
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